Human VEGF ELISA Kit

Vaskulär endoteltillväxtfaktor (VEGF eller VEGF-A), även känd som vaskulär permeabilitetsfaktor (VPF), är en potent mediator av både angiogenes och vaskulogenes hos foster och vuxna. Det är en medlem av PDGF-familjen som kännetecknas av närvaron av åtta konserverade cysteinrester i en cystinknutstruktur och bildandet av antiparallella disulfid-kopplade dimerer. Människor uttrycker växelvis splitsade isoformer med 121, 145, 165, 183, 189 och 206 aminosyror (aa) långa. VEGF165 verkar vara den mest förekommande och potenta isoformen, följt av VEGF121 och VEGF189. Andra isoformer än VEGF121 innehåller grundläggande heparinbindande regioner och är inte fritt diffunderbara. Humant VEGF165 delar 88% aa-sekvensidentitet med motsvarande regioner av mus- och rått-VEGF. VEGF uttrycks i flera celler och vävnader inklusive skelett- och hjärtmuskel, hepatocyter, osteoblaster, neutrofiler, makrofager, keratinocyter, brun fettvävnad, CD34+ stamceller, endotelceller, fibroblaster och vaskulära glatta muskelceller. VEGF-uttryck induceras av hypoxi och cytokiner såsom IL-1, IL-6, IL-8, onkostatin M och TNF-alfa. VEGF-isoformer uttrycks differentiellt under utveckling och hos vuxna. - VEGF-dimerer binder till två besläktade receptortyrosinkinaser, VEGF R1 (även kallad Flt-1) och VEGF R2 (Flk-1/KDR), och inducerar deras homodimerisering och autofosforylering. Dessa receptorer har sju extracellulära immunglobulinliknande domäner och en intracellulär delad tyrosinkinasdomän. De uttrycks på vaskulära endotelceller och en rad icke-endotelceller. Även om VEGF-affiniteten är högst för bindning till VEGF Rl, verkar VEGF R2 vara den primära mediatorn av VEGF-angiogen aktivitet. VEGF165 binder också semaforinreceptorn, neuropilin-1, vilket främjar komplexbildning med VEGF R2. - VEGF är mest känd för sin roll i vaskulogenes. Under embryogenes reglerar VEGF proliferationen, migrationen och överlevnaden av endotelceller, vilket reglerar blodkärlens täthet och storlek, men spelar ingen roll för att bestämma vaskulära mönster. VEGF främjar benbildning genom osteoblast- och kondroblasterkrytering och är också en monocyt-kemoattraktant. Efter födseln bibehåller VEGF endotelcellernas integritet och är en potent mitogen för mikro- och makro-vaskulära endotelceller. Hos vuxna fungerar VEGF främst vid sårläkning och den kvinnliga reproduktionscykeln. I sjuka vävnader främjar VEGF vaskulär permeabilitet. Det anses således bidra till tumörmetastaser genom att främja både extravasation och tumörangiogenes. Olika strategier har använts terapeutiskt för att antagonisera VEGF--medierad tumörangiogenes. Cirkulerande VEGF-nivåer korrelerar med sjukdomsaktivitet vid autoimmuna sjukdomar såsom reumatoid artrit, multipel skleros och systemisk lupus erythematosus.

pg/ml	O.D.		Genomsnittlig	Rättad
0.00	0.0275	0.0264	0.0270
31.25	0.1190	0.1082	0.1136	0.0867
62.50	0.1991	0.2040	0.2016	0.1746
125.00	0.3159	0.2863	0.3011	0.2742
250.00	0.5521	0.6045	0.5783	0.5514
500.00	1.1560	1.2260	1.1910	1.1641
1000.00	2.3170	2.2130	2.2650	2.2381
2000.00	3.6280	3.4990	3.5635	3.5366

	Intra-assay Precision			Inter-assay Precision
Provnummer	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Genomsnitt (pg/ml)	53.2	229.1	694.5	31.6	160.6	438.1
Standardavvikelse	3.6	13.3	38.4	2.1	8.2	13.6
Variationskoefficient（%）	6.8	5.8	5.5	6.5	5.1	3.1

Intra-assayprecision (precision inom en analys) Tre prover med känd koncentration testades tjugo gånger på en platta för att bedöma intra-assayprecisionen.

Inter-assayprecision (precision mellan analyser) Tre prover med känd koncentration testades sex gånger på en platta för att bedöma intra-assayprecisionen.

Spike-återvinningen utvärderades genom att spika 3 nivåer av humant VEGF/VEGFA i ett hälsoprov av humant serum. Det otillsatta serumet användes som blank i detta experiment.

Återvinningen varierade från 94 % till 119 % med en total genomsnittlig återhämtning på 105 %.

Provmatris	Prov Utvärderad	Räckvidd (pg/ml)	Detekterbar %	Medelvärde för detekterbar (pg/ml)
Serum	30	25.21-450.32	100.0	185.52

Serum/Plasma – Trettio prover från till synes friska frivilliga utvärderades med avseende på närvaron av VEGF i denna analys. Ingen medicinsk historia var tillgänglig för donatorerna.