Översikt över Western Blot

Western blot, ibland kallad proteinimmunoblot, är en mycket använd analytisk teknik inom molekylärbiologi och immunogenetik för att detektera specifika proteiner i ett prov av vävnadshomogenat eller extrakt. Förutom att detektera proteiner, används denna teknik också för att visualisera, särskilja och kvantifiera olika proteiner i en komplex proteinblandning.

Viktiga steg i Western Blot-tekniken

Western blot-tekniken innefattar tre huvudsteg: separation efter storlek, överföring av proteiner till ett fast underlag och märkning av målproteinet med hjälp av primära och sekundära antikroppar för visualisering. En syntetisk eller animalisk antikropp (den primära antikroppen) skapas för att känna igen och binda till ett specifikt målprotein. Elektroforesmembranet tvättas i en lösning innehållande den primära antikroppen, varefter överskott av antikropp tvättas bort. En sekundär antikropp tillsätts sedan, som känner igen och binder till den primära antikroppen. Den sekundära antikroppen visualiseras genom olika metoder, såsom färgning, immunfluorescens och radioaktivitet, vilket möjliggör indirekt detektering av det specifika målproteinet.

Relaterade tekniker

Andra relaterade tekniker inkluderar dot blot-analys, kvantitativ dot-blot, immunhistokemi och immunocytokemi, där antikroppar används för att detektera proteiner i vävnader och celler genom immunfärgning, såväl som enzymlänkad immunosorbentanalys (ELISA).