Human IL-8/CXCL8 ELISA Kit

Interleukin-8 (IL-8), även känd som IL-8, GCP-1 och NAP-1, är en heparin-bindande 8-9 kDa medlem av alfa- eller CXC-familjen av kemokiner. Det finns minst 15 mänskliga CXC-familjemedlemmar som alla antar en struktur med tre beta -ark/en alfa -helix. De flesta CXC-kemokiner visar ett N-terminalt Glu-Leu-Arg (ELR) tripeptidmotiv. IL-8 cirkulerar som en monomer, homodimer och heterodimer med CXCL4/PF4. Monomeren anses vara den mest bio-aktiva, medan heterodimeren kan potentiera PF4-aktivitet. IL-8-oligomerisering moduleras av dess interaktioner med matrix och cellyteglykosaminoglykaner (GAG). Mogen human IL-8 delar 65-69% aminosyra (aa) identitet med hund, katt och svin IL-8. Det finns ingen IL-8-genmotsvarighet hos gnagare. - Flera isoformer av IL-8 genereras genom både alternativ splitsning och differentiell proteolytisk klyvning. Hos människor genererar alternativ splitsning en iso-form med en elva aa substitution vid C-terminalen. Proteolytisk bearbetning resulterar i N-terminal trunkering av IL-8 och är sannolikt en cell-specifik händelse. Till exempel genererar fibroblaster och endotelceller 1-77-formen genom att klyva IL-8 efter Glu21, medan monocyter och lymfocyter genererar 6-77-formen genom att klyva efter Leu25. Dessa trunkerade former visar generellt ökad bioaktivitet, särskilt genom CXCR1-receptorn. IL-8 kan också genomgå citrullinering på Arg27 av prekursorn, en modifiering som ökar dess halveringstid och förmåga att inducera leukocytos. En mängd olika celler utsöndrar IL-8 inklusive monocyter och neutrofiler, fibroblaster och keratinocyter, mastceller, viscerala glatta muskelceller, dendritiska celler, stora alveolära celler av typ II och endotelceller. - IL-8 bioaktivitet medieras genom två G-protein-kopplade receptorer, benämnda CXCR1/IL-8 RA och CXCR2/IL-8 RB. CXCR1 är 45-50 kDa i storlek och används nästan uteslutande av IL-8. CXCR2 är 35-40 kDa i storlek och används av nästan alla CXC-kemokiner. Både CXCR1 och CXCR2 associeras konstitutivt till funktionella homodimerer. De kan också heterodimerisera, men dessa komplex dissocierar efter IL-8-bindning. CXCR2 svarar på låga koncentrationer av IL-8 och är huvudsakligen associerad med kemotaxi och MMP-9-frisättning. CXCR1, däremot, svarar på höga koncentrationer av IL-8 och är associerad med respiratorisk burst och fosfolipas D2-aktivering. Således inducerar CXCR2-ligering leukocytadhesion till aktiverat vaskulärt endotel och migration till platser för inflammation, medan CXCR1-ligering primerar neutrofil antimikrobiell aktivitet. IL-8 kan också bilda ett komplex med Serpin A1/alpha-1 Antitrypsin, och detta förhindrar IL-8-interaktion med CXCR1. - Förutom dess pro-inflammatoriska effekter är IL-8 involverad i angiogenes och patogenesen av ateroskleros och cancer. Det inducerar VEGF-uttryck i vaskulära endotelceller och fungerar som en autokrin faktor för EC-tillväxt och angiogenes. Det är uppreglerat i aterosklerotiska lesioner och är förhöjt i serum och cerebrospinalvätska efter hjärtinfarkt. I cancer främjar IL-8 epitelial-mesenkymal övergång såväl som tumörcellinvasivitet och metastaser.

pg/ml	O.D.		Genomsnittlig	Rättad
0.00	0.0381	0.0373	0.0377
4.12	0.0493	0.0533	0.0513	0.0136
12.35	0.0743	0.0785	0.0764	0.0387
37.04	0.1583	0.1604	0.1594	0.1217
111.11	0.3773	0.3767	0.377	0.3393
333.33	0.9294	0.9447	0.9371	0.8994
1000.00	2.3256	2.3424	2.3340	2.2963
3000.00	4.0171	4.1382	4.0777	4.0400

	Intra-assay Precision			Inter-assay Precision
Provnummer	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Genomsnitt (pg/ml)	54.3	279.3	896.1	51.2	259.7	780.4
Standardavvikelse	1.9	8.3	31.3	3.4	14.2	25.7
Variationskoefficient (%)	3.4	3	3.5	6.7	5.5	3.3

Intra-assayprecision (precision inom en analys) Tre prover med känd koncentration testades tjugo gånger på en platta för att bedöma intra-assayprecisionen.

Inter-assayprecision (precision mellan analyser) Tre prover med känd koncentration testades sex gånger på en platta för att bedöma intra-assayprecisionen.

Spike-återvinningen utvärderades genom att spika 3 nivåer av humant IL-8 i ett hälsoprov från humant serum. Det otillsatta serumet användes som blank i detta experiment.
Återvinningen varierade från 84 % till 117 % med en total genomsnittlig återhämtning på 102 %.

Provmatris	Prov utvärderat	Område (pg/ml)	Detekterbar (%)	Medelvärde för detekterbar (pg/ml)
Serum	30	43,4-359,3	100	127.2

Serum/plasma – Trettio prover från till synes friska frivilliga utvärderades med avseende på närvaron av IL-8 i denna analys. Ingen medicinsk historia var tillgänglig för donatorerna.