Human IL-6 ELISA Kit

Interleukin 6 (IL-6) är ett pleiotropt, a-helix, 22-28 kDa fosforylerat och variabelt glykosylerat cytokin som spelar viktiga roller i den akuta fasreaktionen, inflammation, hematopoies, benmetabolism och cancerprogression. Moget humant IL-6 är 183 aminosyror (aa) långt och delar 39 % aa-sekvensidentitet med mus och råtta IL-6. Alternativ splitsning genererar flera isoformer med interna deletioner, av vilka några uppvisar antagonistiska egenskaper. Celler som är kända för att uttrycka IL-6 inkluderar CD8+ T-celler, fibroblaster, synoviocyter, adipocyter, osteoblaster, megakaryocyter, endotelceller (under påverkan av endoteliner), sympatiska neuroner, hjärnbarksneuroner, binjuremärgkromaffinceller, näthinneceller, pigmentceller i näthinnan, k-celler, retinalceller fetala och vuxna astrocyter, neutrofiler, monocyter, eosinofiler, colon epitelceller, B1 B-celler och pankreatiska öar betaceller. IL-6-produktion är i allmänhet korrelerad med cellaktivering och hålls normalt under kontroll av glukokortikoider, katekolaminer och sekundära könssteroider. Normalt humant cirkulerande IL-6 är i intervallet 1 pg/ml, med små förhöjningar under menstruationscykeln, måttliga förhöjningar i vissa cancerformer och stora förhöjningar efter operation.IL-6 inducerar signalering genom ett cellyte heterodimert receptorkomplex som består av en ligandbindande subenhet (IL-6 R alfa) och en signaltransducerande subenhet (gp1 sub30). IL-6 binder till IL-6 Ra, utlöser IL-6 Ra-association med gp130- och gp130-dimerisering. gp130 är också en komponent i receptorerna för CLC, CNTF, CT-1, IL-11, IL-27, LIF och OSM. Lösliga former av IL-6 Ra genereras av både alternativ splitsning och proteolytisk klyvning. I en mekanism som kallas trans-signalering, framkallar komplex av lösligt IL-6 och IL-6 Ra svar från gp130-uttryckande celler som saknar cellyte-IL-6 Ra. Trans-signalering gör det möjligt för ett bredare spektrum av celltyper att svara på IL-6, eftersom uttrycket av gp130 är allestädes närvarande, medan uttrycket av IL-6 Ra huvudsakligen är begränsat till hepatocyter, monocyter och vilande lymfocyter. Lösliga splitsformer av gp130 blockerar trans-signalering från IL-6/IL-6 Ra men inte från andra cytokiner som använder gp130 som en co-receptor.IL-6, tillsammans med TNF-a och IL-1, driver det akuta inflammatoriska svaret. IL-6 är nästan enbart ansvarig för feber och det akuta fassvaret i levern, och det är viktigt vid övergången från akut inflammation till antingen förvärvad immunitet eller kronisk inflammatorisk sjukdom. När den är oreglerad bidrar den till kronisk inflammation vid tillstånd som fetma, insulinresistens, inflammatorisk tarmsjukdom, artrit och sepsis. IL-6 modulerar benresorption och är en viktig effektor av inflammatorisk leddestruktion vid reumatoid artrit genom dess främjande av Th17-cellutveckling och aktivitet. Det bidrar till utveckling och destabilisering av aterosklerotisk plack samt utveckling av inflammation-associerad karcinogenes.

pg/ml	O.D.		Genomsnittlig	Rättad
0	0.021	0.024	0.0225
1.37	0.0293	0.0281	0.0287	0.0062
4.12	0.0454	0.0467	0.0461	0.0236
12.35	0.096	0.0964	0.0962	0.0737
37.04	0.271	0.2485	0.2598	0.2373
111.11	0.682	0.6878	0.6849	0.6624
333.33	1.8285	1.7097	1.7691	1.7466
1000	3.7268	3.8787	3.8028	3.7803

	Intra-assay Precision			Inter-assay Precision
Provnummer	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Genomsnitt (pg/ml)	24	115.4	263.2	24.5	132.1	353.3
Standardavvikelse	1.3	4.5	9.3	2	5.9	18.4
Variationskoefficient (%)	5.6	3.9	3.6	6.2	4.4	5.2

Intra-assayprecision (precision inom en analys) Tre prover med känd koncentration testades tjugo gånger på en platta för att bedöma intra-assayprecisionen.

Inter-assayprecision (precision mellan analyser) Tre prover med känd koncentration testades sex gånger på en platta för att bedöma intra-assayprecisionen.

Spike-återvinningen utvärderades genom att spika 3 nivåer av humant IL-6 i ett hälsoprov av humant serum. Det otillsatta serumet användes som blank i detta experiment.

Återvinningen varierade från 84 % till 115 % med en total genomsnittlig återhämtning på 99 %.

Provmatris	Prov utvärderat	Område (pg/ml)	Detekterbar (%)	Medelvärde för detekterbar (pg/ml)
Serum	30	2,12-6,46	100	3.53

Serum/Plasma – Trettio prover från till synes friska frivilliga utvärderades med avseende på närvaron av IL-10 i denna analys. Ingen medicinsk historia var tillgänglig för donatorerna.

n.d. = ej-detekterbar. Prover uppmätta under känsligheten anses vara omöjliga att detektera.