Western Blot'a Genel Bakış

Bazen protein immünoblot olarak da adlandırılan western blot, bir doku homojenatı veya ekstrakt numunesindeki spesifik proteinleri tespit etmek için moleküler biyoloji ve immünogenetikte yaygın olarak kullanılan bir analitik tekniktir. Bu teknik, proteinleri tespit etmenin yanı sıra karmaşık bir protein karışımındaki farklı proteinleri görselleştirmek, ayırt etmek ve ölçmek için de kullanılır.

Western Blot Tekniğinin Temel Adımları

Western blot tekniği üç ana adımı içerir: boyuta göre ayırma, proteinlerin katı bir desteğe aktarılması ve görselleştirme için birincil ve ikincil antikorlar kullanılarak hedef proteinin işaretlenmesi. Belirli bir hedef proteini tanımak ve ona bağlanmak için sentetik veya hayvandan türetilmiş bir antikor (birincil antikor) oluşturulur. Elektroforez membranı, birincil antikoru içeren bir çözelti içinde yıkanır ve ardından fazla antikor yıkanır. Daha sonra birincil antikoru tanıyan ve ona bağlanan ikincil bir antikor eklenir. İkincil antikor, boyama, immünofloresan ve radyoaktivite gibi çeşitli yöntemlerle görselleştirilir ve spesifik hedef proteinin dolaylı olarak saptanmasına olanak tanır.

İlgili Teknikler

Diğer ilgili teknikler arasında nokta lekeleme analizi, kantitatif nokta lekeleme, immünohistokimya ve immünositokimya yer alır; burada antikorlar, immün boyama yoluyla doku ve hücrelerdeki proteinleri tespit etmek için kullanılır, ayrıca enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA).