엑소 좀 추출 키트 (우유)

엑소 좀은 혈액, 타액, 소변 및 우유와 같은 체액에 풍부한 세포에 의해 분비 된 RNA 및 단백질을 함유하는 작은 소포 (30 - 150nm)이다. 엑소 좀은 세포 간 메신저의 기능을 갖는 것으로 간주되어 특정 세포 사이에 이펙터 또는 신호 분자를 전달한다. 그러나, 이의 구조, 이펙터의 구성 및 관련된 생물학적 경로는 현재 불분명하다.

엑소 좀의 생물학적 기능 연구에서 완전한 입자를 분리해야하지만, 기존의 초 원심 분리 방법은 복잡한 단계, 하드웨어에 대한 높은 요구 사항 및 어려운 작동의 특성을 가지고있다. 성분의 최적화 후 에멀젼에서 엑소 좀의 추출에 적합한 umibiois에 의해 독립적으로 개발 된 엑소 좀의 빠른 추출 키트는, 이는 고열 엑소 좀 입자를 빠르고 효율적으로 수득 할 수있다. 전자 현미경 분석, NTA 입자 크기 분석, 핵산 분석, 단백질 분석, 세포 학적 실험, 동물 실험 등에 적용될 수 있습니다.

고속 - 속도 원심 분리기 (최대 10000 g 원심력), 소용돌이 발진기; 50 mL 원심 분리 로터, 50mL 원심 튜브, 2mL 원심 분리 로터, 1.5 mL 원심 튜브, PBS 완충액.

* 뉴 클레아 제 - 자유, 멸균

• · 세포 상청액, 조직, 소변, 혈청, 혈장, 우유 등을 덮습니다.
• · 유사한 제품의 최대 5 배까지 높은 샘플 처리 용량.
• · 엑소 좀은 세포 공동 - 배양 및 omics 연구에 사용될 수 있습니다.
• · 연구 개발을위한 엑소 좀 키트의 지속적인 최적화에 전념합니다.
• · 300 명 이상의 고객이 신뢰하여 걱정 - 무료 구매 및 사용.
• · 비용 - 비용을 절감하면서 대규모 연구를 지원하는 데 효과적입니다.

I. 샘플 전처리

1. 샘플링 : 냉동 샘플의 경우 냉장고에서 꺼내 25 ° C 수조에서 해동하여 완전히 해동 된 샘플을 얼음 위에 놓습니다. 신선한 샘플의 경우 샘플을 수집하여 얼음 위에 놓습니다.

2. 샘플의 초기 복용량 : (단일 추출을위한 샘플 복용량)

3. 지질을 제거하기위한 원심 분리 : 샘플을 원심 튜브로 옮기고 10000에서 4 ℃에서 원심 분리 g 20 분 동안 샘플로부터 지질 및 일부 단백질을 제거하고;(참고 : 샘플은 원심 분리 후 3 개의 층으로 나뉘며, 상부 층은 지질 층이며, 하부 층은 단백질 침전물, 중간 층은 유청입니다). 원심 분리 후, 상부 층의 상태는 "컴팩트하고 안정적이며 떨어질 수 없다". 상부 층이 "푹신하고 쉽게 떨어지기 쉽다"고 하단 층에 많은 침전물이있는 경우,이 단계는 연속적으로 반복 될 수 있고 각 원심 분리 후 중간 층 액체를 취해야한다).

4. 유청 전달 : 지질이 새로운 50ml 원심 튜브로 제거 된 유청 (중간 층 액체)을 전달;(참고 : 지질의 상부 층은 스피어 헤드에 의해 구멍을 뚫고 천천히 덤핑하거나 피펫으로 옮겨 질 수 있습니다. 전달 된 유청에 소량의 지질과 침전물이 있다는 것은 정상적인 현상입니다. 이는 후속 실험에 영향을 미치지 않습니다.

II 불순한 단백질 제거

1. 유청 정착 : 추가 해결책 a 유청에. 원심 분리 튜브를 뒤집어 "반투명"이 될 때까지 철저히 섞으십시오. 그런 다음 추가하십시오 해결책 b 튜브를 뒤집어 철저하게 섞습니다. 10 분 동안 2 2 ~ 8 ℃에 서도록하십시오. (참고 : 정적 배치가 완료되면 원심 분리 튜브를 부드럽게 흔들어 놓습니다.“두부 푸딩 - 좋아요”고체가 제시되고 유체는“투명”됩니다. "두부 푸딩"상태가 표시되지 않거나 샘플이 여전히 "우유 흰색"인 경우, 유체가 "투명"할 때까지 적절한 양의 솔루션 B를 추가 할 수 있습니다.)

참고 : 위의 표 비율에 따라 추가 할 특정 복용량을 전환하십시오.

2. 단백질을 제거하기위한 원심 분리 : 10 분 동안 10000 g에서 4 ℃에서 침전 된 유청을 원심 분리하고 상청액을 수집합니다.

3. 상청액 여과 : 수집 된 상청액을 50 mL 원심 분리 및 여과 컬럼으로 옮기고 3000 g에서 2 분 동안 4 ℃에서 원심 분리; (참고 : 상청액이 완전히 필터링되지 않으면이 단계를 반복 할 수 있습니다. 50ml 원심 분리 및 여과 컬럼은 일회용 물질이며 반복적 인 사용은 권장되지 않습니다.)

4. 여과 된 상청액을 새로운 원심 튜브로 옮기고 추가하십시오. 해결책 c 그것을 철저히 혼합하기 위해 그것을 반전시킵니다. (참고 : 용액 C의 복용량은 용액의 복용량과 일치해야한다. b)

III 엑소 좀 추출

1. 상청액 전처리 : 추가 해결책 d 상청액에 추가되었습니다 해결책 c및 특정 복용량은 다음과 같습니다.

참고 : 테이블의 시약 복용량의 동일한 비율에 따라 다른 복용량을 변환하십시오.

2. 솔루션 혼합 : 추가 후 해결책 d, 원심 튜브를 단단히 덮고, 소용돌이 발진기를 1 분 동안 균일하게 섞는다. 그런 다음 적어도 2 시간 동안 2 ℃에서 8 ℃에서 서있게하십시오. (참고 : 스탠딩 시간을 추가하면 엑소 좀 달성률이 높아질 수 있지만 스탠딩 시간은 24 시간을 초과하지 않아야합니다)

3. 엑소 좀 엑소 좀 : 혼합 된 주류로 원심 튜브를 꺼내서 10000에서 4 ℃에서 원심 분리하도록하십시오. g 60 분 동안, 상청액을 폐기하고, 침전은 엑소 좀 입자가 풍부합니다.(참고 : 상청액은 가능한 한 많이 빨아 져야합니다)

4. 엑소 좀을 재현 탁시키기 : 1 × PBS를 복용하고 원심 분리 침전물을 돌리십시오 (특정 복용량은 다음 표를 참조하십시오). 용해 된 후, 재현 탁 된 용액을 새로운 1.5 mL 원심 튜브로 옮깁니다.

참고 : 테이블의 시약 복용량의 동일한 비율에 따라 다른 복용량을 변환하십시오.

5. 엑소 좀 입자 얻기 : 원심 분리기 1.5 mL 원심 분리 튜브를 4 ℃에서 12000에서 재현 탁 된 용액으로 g 5 분 동안 상청액을 보관하십시오. 이 상청액은 엑소 좀 입자가 풍부합니다. (참고 : 많은 양의 침전물의 경우,이 단계는 명백한 강수량이 없을 때까지 여러 번 반복 할 수 있습니다. 각 원심 분리 후 상청액을 수집하십시오. 엑소 좀 용액은 밝은 유백색 흰색을 가질 수 있습니다.

6. 엑소 좀 저장 : 정제 된 엑소 좀은 50 - 100 μl로 포장하고 후속 실험 사용을 위해 - 80 ℃에서 낮은 온도 냉장고에 저장해야한다.

IV 저장 조건

이 제품은 실온에서 24 시간 동안 안정적으로 저장 될 수 있습니다. 사용하기 전에 철저히 혼합하십시오.

v 예방 조치

이 제품은 생명 과학 연구만을위한 것이며 의료 진단 또는 기타 목적은 금지됩니다!