FACS 과정은 세포의 특정 단백질이나 핵산에 결합하는 형광 항체나 염료로 세포를 표지하는 것으로 시작됩니다. 이러한 형광 마커를 사용하면 유세포 분석기가 표적 분자의 발현을 기반으로 다양한 세포 유형을 감지하고 구별할 수 있습니다. 실험 요구 사항에 따라 형광 단백질과 인터칼레이팅 염료를 사용하여 세포에 라벨을 붙일 수도 있습니다. 이 라벨링은 세포가 유세포 분석기를 통과할 때 기기가 형광 강도를 정확하게 측정할 수 있도록 보장합니다.

레이블이 지정되면 세포 혼합물은 단일 파일로 기기의 플로우 셀을 통해 흐릅니다. 각 개별 세포가 레이저 빔을 통과할 때 검출기는 형광, 전방 산란광(FSC), 측면 산란광(SSC)의 세 가지 주요 매개변수를 포착합니다. FSC는 셀 크기에 대한 정보를 제공하는 반면, SSC는 셀의 내부 복잡성 또는 세분성에 대한 통찰력을 제공합니다. 형광 신호는 세포 표면에 존재하는 단백질이나 마커에 대한 특정 데이터를 제공하여 세포 집단 간의 추가 분화를 가능하게 합니다.

FACS 장비에는 다양한 파장에 걸쳐 형광을 측정하는 여러 레이저, 필터 및 검출기가 장착되어 있어 여러 형광 마커를 동시에 검출할 수 있습니다. 이 다중 매개변수 검출은 복잡한 세포 혼합물의 식별 및 분류가 필요한 실험에 핵심입니다. FACS의 다양성을 통해 사용자는 특정 형광 마커와 분석 중인 세포의 특성을 기반으로 실험을 맞춤화할 수 있습니다.

셀의 특성이 분석되면 기기는 정전기 편향을 사용하여 셀을 다른 용기에 물리적으로 분류합니다. 특정 사용자-정의 기준을 충족하는 셀은 충전되어 지정된 컨테이너로 전환됩니다. 이 정밀한 분류 과정을 통해 연구자는 추가 분석이나 실험 조작을 위해 세포의 하위 집단을 분리할 수 있으므로 FACS는 매우 구체적인 세포 집단이 필요한 실험에 필수적인 도구가 됩니다.