Panoramica di Western blot

La macchia occidentale, a volte chiamata immunoblot proteica, è una tecnica analitica ampiamente utilizzata in biologia molecolare e immunogenetica per rilevare proteine ​​specifiche in un campione di omogenato o estratto tissutale. Oltre a rilevare le proteine, questa tecnica viene anche utilizzata per visualizzare, distinguere e quantificare diverse proteine ​​in una miscela proteica complessa.

Passi chiave nella tecnica Western blot

La tecnica Western blot prevede tre passaggi principali: separazione per dimensione, trasferimento di proteine ​​a un supporto solido e segnamento della proteina bersaglio usando anticorpi primari e secondari per la visualizzazione. Un anticorpo sintetico o animale - derivato (l'anticorpo primario) viene creato per riconoscere e legarsi a una specifica proteina target. La membrana di elettroforesi viene lavata in una soluzione contenente l'anticorpo primario, dopo di che viene lavato l'anticorpo in eccesso. Viene quindi aggiunto un anticorpo secondario, che riconosce e si lega all'anticorpo primario. L'anticorpo secondario viene visualizzato attraverso vari metodi, come colorazione, immunofluorescenza e radioattività, consentendo la rilevazione indiretta della proteina target specifica.

Tecniche correlate

Altre tecniche correlate includono l'analisi della blot DOT, la macchia di punto quantitativa, l'immunoistochimica e l'immunocitochimica, in cui gli anticorpi sono usati per rilevare le proteine ​​nei tessuti e nelle cellule mediante immunocolorazione, nonché enzima - anzima - test immunosorbente collegato (ELISA).