Kit ELISA per TNF-α di ratto

Il fattore di necrosi tumorale alfa (TNF-alfa), noto anche come cachectina e TNFSF1A, è il ligando prototipo della superfamiglia del TNF. È una molecola pleiotropica che svolge un ruolo centrale nell’infiammazione, nello sviluppo del sistema immunitario, nell’apoptosi e nel metabolismo dei lipidi. Il TNF-alfa è anche coinvolto in una serie di condizioni patologiche tra cui asma, morbo di Crohn, artrite reumatoide, dolore neuropatico, obesità, diabete di tipo 2, shock settico, autoimmunità e cancro.
Il TNF-alfa murino è sintetizzato come una proteina transmembrana di tipo II da 26 kDa che consiste in un dominio citoplasmatico di 35 aminoacidi (aa), un segmento transmembrana di 21 aa e un dominio extracellulare (ECD) di 179 aa. All'interno dell'ECD, il TNF-alfa del topo condivide il 95% di identità aa con il ratto e l'80% di identità aa con il TNF-alfa canino, equino, felino, umano, coniglio e suino. È prodotto da un’ampia varietà di cellule immunitarie, epiteliali, endoteliali e tumorali. Il TNF-alfa viene assemblato a livello intracellulare per formare un omotrimero legato in modo non covalente che viene espresso sulla superficie cellulare.
Il TNF-alfa della superficie cellulare può sia indurre la lisi delle cellule tumorali e delle cellule infette da virus, sia generare la propria segnalazione cellulare a valle dopo la legatura mediante TNF RI solubile. La perdita del TNF-alfa legato alla membrana da parte di TACE/ADAM17 rilascia la citochina bioattiva, un trimero solubile da 55 kDa contenente il dominio extracellulare del TNF-alfa.
Il TNF-alfa lega l'onnipresente TNF RI da 55-60 kDa e il TNF RII da 78-80 kDa ristretto nelle cellule ematopoietiche, entrambi espressi anche come omotrimeri. Entrambi i recettori di tipo I e di tipo II legano il TNF-alfa con affinità comparabile e possono promuovere l'attivazione di NFkB. Solo il TNF RI, tuttavia, contiene un dominio di morte citoplasmatica che innesca l'attivazione dell'apoptosi. Forme solubili di entrambi i tipi di recettori vengono rilasciate nel siero e nelle urine umani e possono neutralizzare l'attività biologica del TNF.

pg/ml	D.O.		Nella media	Corretto
0.00	0.0353	0.0308	0.0331
1.37	0.0482	0.0401	0.0442	0.0111
4.12	0.0569	0.0541	0.0555	0.0225
12.35	0.1048	0.0974	0.1011	0.0681
37.04	0.2352	0.2276	0.2314	0.1984
111.11	0.6121	0.5822	0.5972	0.5641
333.33	1.5680	1.4950	1.5315	1.4985
1000.00	3.4880	3.3700	3.4290	3.3960

	Precisione intra-test			Precisione inter-test
Numero del campione	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Media (pg/ml)	23.2	99.7	315.4	21.5	96.1	288.4
Deviazione standard	1.3	4.3	12.8	6.9	3.1	1.0
Coefficiente di variazione(%)	5.5	4.3	4.1	2.4	3.3	4.8

Precisione intra-test (Precisione all'interno di un test) Tre campioni con concentrazione nota sono stati analizzati venti volte su una piastra per valutare la precisione intra-test.

Precisione intra-analisi (precisione tra analisi) Tre campioni con concentrazione nota sono stati analizzati sei volte su una piastra per valutare la precisione intra-analisi.

Il recupero del picco è stato valutato aggiungendo 3 livelli di IL-6 umana a un campione di siero di ratto sano. Il siero non addizionato è stato utilizzato come bianco in questo esperimento. Il recupero variava dal 97% al 108% con un recupero medio complessivo del 103%.

Matrice del campione	Campione valutato	Intervallo (pg/ml)	Rilevabile (%)	Media rilevabile (pg/ml)
Siero	30	1.82-3.57	100	2.94

Siero/Plasma – In questo test è stata valutata la presenza di TNF-α in trenta campioni di ratti apparentemente sani. Non erano disponibili le cartelle cliniche dei donatori.

nd = non-rilevabile. I campioni misurati al di sotto della sensibilità sono considerati non-rilevabili.