Kit ELISA VEGF umano

Il fattore di crescita dell'endotelio vascolare (VEGF o VEGF-A), noto anche come fattore di permeabilità vascolare (VPF), è un potente mediatore sia dell'angiogenesi che della vasculogenesi nel feto e nell'adulto. È un membro della famiglia PDGF caratterizzata dalla presenza di otto residui di cisteina conservati in una struttura a nodo di cistina e dalla formazione di dimeri antiparalleli legati a disolfuro. Gli esseri umani esprimono isoforme di giunzione alternata di 121, 145, 165, 183, 189 e 206 aminoacidi (aa) di lunghezza. VEGF165 sembra essere l'isoforma più abbondante e potente, seguita da VEGF121 e VEGF189. Le isoforme diverse da VEGF121 contengono regioni basiche che legano l'eparina e non sono liberamente diffusibili. Il VEGF165 umano condivide l'88% dell'identità della sequenza aa con le corrispondenti regioni del VEGF di topo e ratto. Il VEGF è espresso in molteplici cellule e tessuti tra cui muscolo scheletrico e cardiaco, epatociti, osteoblasti, neutrofili, macrofagi, cheratinociti, tessuto adiposo bruno, cellule staminali CD34+, cellule endoteliali, fibroblasti e cellule muscolari lisce vascolari. L'espressione di VEGF è indotta dall'ipossia e da citochine come IL-1, IL-6, IL-8, oncostatina M e TNF-alfa. Le isoforme del VEGF sono espresse in modo differenziale durante lo sviluppo e nell'adulto. - I dimeri di VEGF si legano a due recettori tirosin chinasi correlati, VEGF R1 (chiamato anche Flt-1) e VEGF R2 (Flk-1/KDR), e ne inducono l'omodimerizzazione e l'autofosforilazione. Questi recettori hanno sette domini extracellulari simili alle immunoglobuline e un dominio tirosin chinasico intracellulare diviso. Sono espressi sulle cellule endoteliali vascolari e su una serie di cellule non-endoteliali. Sebbene l'affinità del VEGF sia massima per il legame con il VEGF R1, il VEGF R2 sembra essere il mediatore primario dell'attività angiogenica del VEGF. VEGF165 lega anche il recettore della semaforina, la neuropilina-1, che promuove la formazione di complessi con VEGF R2. - Il VEGF è meglio conosciuto per il suo ruolo nella vasculogenesi. Durante l'embriogenesi, il VEGF regola la proliferazione, la migrazione e la sopravvivenza delle cellule endoteliali, regolando così la densità e le dimensioni dei vasi sanguigni, ma non svolgendo alcun ruolo nel determinare i pattern vascolari. Il VEGF promuove la formazione ossea attraverso il reclutamento di osteoblasti e condroblasti ed è anche un chemiotattico dei monociti. Dopo la nascita, il VEGF mantiene l'integrità delle cellule endoteliali ed è un potente mitogeno per i micro- e cellule endoteliali macro-vascolari. Negli adulti, il VEGF funziona principalmente nella guarigione delle ferite e nel ciclo riproduttivo femminile. Nei tessuti malati, il VEGF promuove la permeabilità vascolare. Si ritiene quindi che contribuisca alla metastasi tumorale promuovendo sia lo stravaso che l'angiogenesi tumorale. Varie strategie sono state impiegate a livello terapeutico per antagonizzare l'angiogenesi tumorale mediata dal VEGF-. I livelli circolanti di VEGF sono correlati all’attività della malattia nelle malattie autoimmuni come l’artrite reumatoide, la sclerosi multipla e il lupus eritematoso sistemico.

pg/ml	D.O.		Nella media	Corretto
0.00	0.0275	0.0264	0.0270
31.25	0.1190	0.1082	0.1136	0.0867
62.50	0.1991	0.2040	0.2016	0.1746
125.00	0.3159	0.2863	0.3011	0.2742
250.00	0.5521	0.6045	0.5783	0.5514
500.00	1.1560	1.2260	1.1910	1.1641
1000.00	2.3170	2.2130	2.2650	2.2381
2000.00	3.6280	3.4990	3.5635	3.5366

	Precisione intra-test			Precisione inter-test
Numero del campione	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Media（pg/ml）	53.2	229.1	694.5	31.6	160.6	438.1
Deviazione standard	3.6	13.3	38.4	2.1	8.2	13.6
Coefficiente di variazione（%）	6.8	5.8	5.5	6.5	5.1	3.1

Precisione intra-test (Precisione all'interno di un test) Tre campioni con concentrazione nota sono stati analizzati venti volte su una piastra per valutare la precisione intra-test.

Precisione intra-analisi (precisione tra analisi) Tre campioni con concentrazione nota sono stati analizzati sei volte su una piastra per valutare la precisione intra-analisi.

Il recupero del picco è stato valutato aggiungendo 3 livelli di VEGF/VEGFA umano a un campione di siero umano sano. Il siero non addizionato è stato utilizzato come bianco in questo esperimento.

Il recupero variava dal 94% al 119% con un recupero medio complessivo del 105%.

Matrice del campione	Campione Valutato	Gamma (pg/ml)	Rilevabile %	Media di rilevabile (pg/ml)
Siero	30	25.21-450.32	100.0	185.52

Siero/Plasma – In questo test è stata valutata la presenza di VEGF in trenta campioni provenienti da volontari apparentemente sani. Non erano disponibili le cartelle cliniche dei donatori.