Kit ELISA umano OX40/TNFRSF4

OX40 (CD134; TNFRSF4) è una molecola costimolatoria delle cellule T della superfamiglia dei recettori del TNF che si coordina con altri costimolatori legati alla membrana come CD28, CD40, CD30, CD27 e 4-1BB. OX40 è espresso sulle cellule T CD4+ naïve solo dopo l'impegno del TCR da parte delle cellule presentanti l'antigene (APC; cellule dendritiche e B) e la costimolazione da parte del ligando CD40/CD40 e CD28/B7. È massimo 2‑5 giorni dopo l'attivazione o 4 ore dopo la riattivazione delle cellule T della memoria. L'OX40 umano è una glicoproteina transmembrana di tipo I da 48 kDa con una sequenza segnale di 28 aminoacidi (aa), un dominio extracellulare (ECD) di 185 aa che ha quattro ripetizioni TNFR-Cys e una regione cerniera O-glicosilata, un segmento transmembrana di 20 aa e un dominio citoplasmatico di 41 aa. L'ECD dell'OX40 umano mostra un'identità aa del 71%, 68%, 67%, 64% e 64% con l'ECD OX40 felino, canino, coniglio, topo e ratto, rispettivamente. L'impegno di OX40 sulle cellule T CD4+ attivate da parte del ligando OX40 sulle cellule dendritiche attivate promuove la sopravvivenza e la proliferazione delle cellule T, prolunga la risposta immunitaria e aumenta il numero di cellule che effettuano la transizione dalle cellule T effettrici alle cellule T di memoria. La trasduzione del segnale OX40 include il legame dei fattori associati al recettore del TNF (TRAF) e l'attivazione della chinasi NF kappa B e PI3 per migliorare l'espressione delle citochine, dei membri antiapoptotici della famiglia Bcl-2, della sopravvivenza e del recettore delle chemochine CXCR5. CXCR5 promuove la migrazione delle cellule T verso i centri germinali per fornire aiuto alle cellule B. Studi condotti su topi knockout o transgenici e anticorpi agonisti o bloccanti mostrano che l'interazione OX40/OX40L è fondamentale per stabilire o riattivare le cellule T della memoria e interrompere la tolleranza immunitaria. Il blocco dell’impegno di OX40 è efficace nei modelli animali di infiammazione allergica delle vie aeree, malattia del trapianto contro l’ospite e malattia autoimmune.

pg/ml	D.O.		Nella media	Corretto
0.00	0.0168	0.0150	0.0159
12.29	0.0413	0.0360	0.0387	0.0228
30.72	0.0754	0.0717	0.0736	0.0577
76.80	0.1554	0.1469	0.1512	0.1353
192.00	0.3511	0.3457	0.3484	0.3325
480.00	0.8416	0.8055	0.8236	0.8077
1200.00	1.8010	1.8460	1.8235	1.8076
3000.00	3.1860	3.2240	3.2050	3.1891

	Precisione intra-test			Precisione inter-test
Numero del campione	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Media (pg/ml)	68.3	374.5	1141.6	69.2	348.2	1106.9
Deviazione standard	2.1	23.5	44.4	3.9	12.7	52.2
Coefficiente di variazione(%)	3.0	6.3	3.9	5.6	3.7	4.7

Precisione intra-test (Precisione all'interno di un test) Tre campioni con concentrazione nota sono stati analizzati venti volte su una piastra per valutare la precisione intra-test.
Precisione intra-analisi (precisione tra analisi) Tre campioni con concentrazione nota sono stati analizzati sei volte su una piastra per valutare la precisione intra-analisi.

Il recupero del picco è stato valutato aggiungendo 3 livelli di OX40/TNFRSF4 umano a un campione di siero umano sano. Il siero non addizionato è stato utilizzato come bianco in questo esperimento.
Il recupero variava dal 93% al 120% con un recupero medio complessivo del 103%.

Matrice del campione	Campione valutato	Intervallo (pg/ml)	Rilevabile (%)	Media rilevabile (pg/ml)
Siero	30	19.5-94.28	100	59.08

Siero/Plasma – In questo test è stata valutata la presenza di OX40/TNFRSF4 in trenta campioni provenienti da volontari apparentemente sani. Non erano disponibili le cartelle cliniche dei donatori.