Kit ELISA IL-8/CXCL8 umano

L'interleuchina-8 (IL-8), nota anche come IL-8, GCP-1 e NAP-1, è un membro da 8-9 kDa che lega l'eparina della famiglia di chemochine alfa o CXC. Ci sono almeno 15 membri della famiglia umana CXC che adottano tutti una struttura a tre fogli beta/una alfa -elica. La maggior parte delle chemochine CXC mostrano un motivo tripeptide N-terminale Glu-Leu-Arg (ELR). IL-8 circola come monomero, omodimero ed eterodimero con CXCL4/PF4. Il monomero è considerato il più bioattivo, mentre l'eterodimero può potenziare l'attività del PF4. L'oligomerizzazione di IL-8 è modulata dalle sue interazioni con i glicosaminoglicani (GAG) della matrice e della superficie cellulare. L'IL-8 umana matura condivide il 65-69% dell'identità degli aminoacidi (aa) con l'IL-8 canina, felina e suina. Non esiste una controparte del gene IL-8 nei roditori. - Isoforme multiple di IL-8 vengono generate sia attraverso lo splicing alternativo che attraverso la scissione proteolitica differenziale. Negli esseri umani, lo splicing alternativo genera un'iso-forma con una sostituzione di undici aa al C-terminale. L'elaborazione proteolitica determina il troncamento N-terminale di IL-8 ed è probabilmente un evento specifico della cellula. Ad esempio, i fibroblasti e le cellule endoteliali generano la forma 1-77 tagliando IL-8 seguendo Glu21, mentre i monociti e i linfociti generano la forma 6-77 tagliando seguendo Leu25. Queste forme troncate generalmente mostrano un aumento della bioattività, in particolare attraverso il recettore CXCR1. IL-8 può anche subire citrullinazione sull'Arg27 del precursore, una modifica che ne aumenta l'emivita-e la capacità di indurre leucocitosi. Un’ampia varietà di cellule secernono IL-8 inclusi monociti e neutrofili, fibroblasti e cheratinociti, mastociti, cellule muscolari lisce viscerali, cellule dendritiche, grandi cellule alveolari di tipo II e cellule endoteliali. - La bioattività di IL-8 è mediata attraverso due recettori accoppiati a proteine ​​G-, denominati CXCR1/IL-8 RA e CXCR2/IL-8 RB. CXCR1 ha una dimensione di 45-50 kDa ed è utilizzato quasi esclusivamente da IL-8. CXCR2 ha una dimensione di 35 - 40 kDa ed è utilizzato da quasi tutte le chemochine CXC. Sia CXCR1 che CXCR2 si associano costitutivamente in omodimeri funzionali. Possono anche eterodimerizzare, ma questi complessi si dissociano in seguito al legame con IL-8. CXCR2 risponde a basse concentrazioni di IL-8 ed è principalmente associato alla chemiotassi e al rilascio di MMP-9. CXCR1, al contrario, risponde ad alte concentrazioni di IL-8 ed è associato al burst respiratorio e all'attivazione della fosfolipasi D2. Pertanto, la legatura di CXCR2 induce l’adesione dei leucociti all’endotelio vascolare attivato e la migrazione verso i siti di infiammazione, mentre la legatura di CXCR1 innesca l’attività antimicrobica dei neutrofili. IL-8 può anche formare un complesso con l'antitripsina Serpina A1/alfa-1 e questo impedisce l'interazione di IL-8 con CXCR1. - Oltre ai suoi effetti pro-infiammatori, IL-8 è coinvolta nell'angiogenesi e nella patogenesi dell'aterosclerosi e del cancro. Induce l'espressione di VEGF nelle cellule endoteliali vascolari e funziona come un fattore autocrino per la crescita della CE e l'angiogenesi. È sovraregolato nelle lesioni aterosclerotiche ed è elevato nel siero e nel liquido cerebrospinale in seguito a infarto miocardico. Nel cancro, IL-8 promuove la transizione epiteliale-mesenchimale nonché l’invasività e la metastasi delle cellule tumorali.

pg/ml	D.O.		Nella media	Corretto
0.00	0.0381	0.0373	0.0377
4.12	0.0493	0.0533	0.0513	0.0136
12.35	0.0743	0.0785	0.0764	0.0387
37.04	0.1583	0.1604	0.1594	0.1217
111.11	0.3773	0.3767	0.377	0.3393
333.33	0.9294	0.9447	0.9371	0.8994
1000.00	2.3256	2.3424	2.3340	2.2963
3000.00	4.0171	4.1382	4.0777	4.0400

	Precisione intra-test			Precisione inter-test
Numero del campione	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Media (pg/ml)	54.3	279.3	896.1	51.2	259.7	780.4
Deviazione standard	1.9	8.3	31.3	3.4	14.2	25.7
Coefficiente di variazione(%)	3.4	3	3.5	6.7	5.5	3.3

Precisione intra-test (Precisione all'interno di un test) Tre campioni con concentrazione nota sono stati analizzati venti volte su una piastra per valutare la precisione intra-test.

Precisione intra-analisi (precisione tra analisi) Tre campioni con concentrazione nota sono stati analizzati sei volte su una piastra per valutare la precisione intra-analisi.

Il recupero del picco è stato valutato aggiungendo 3 livelli di IL-8 umana a un campione di siero umano sano. Il siero non addizionato è stato utilizzato come bianco in questo esperimento.
Il recupero variava dall'84% al 117% con un recupero medio complessivo del 102%.

Matrice del campione	Campione valutato	Intervallo (pg/ml)	Rilevabile (%)	Media rilevabile (pg/ml)
Siero	30	43.4-359.3	100	127.2

Siero/Plasma – In questo test è stata valutata la presenza di IL-8 in trenta campioni provenienti da volontari apparentemente sani. Non erano disponibili le cartelle cliniche dei donatori.