Kit ELISA CCL5/RANTES umano

RANTES (Regulated upon Activation, Normal T cell Expressed and presumibilmente Secreted), noto anche come CCL5, è un membro della sottofamiglia "CC" delle chemochine. Svolge un ruolo primario nella risposta immunitaria infiammatoria attraverso la sua capacità di chemioattrarre i leucociti e modulare la loro funzione. Il cDNA di RANTES è stato inizialmente scoperto mediante ibridazione sottrattiva come sequenza specifica delle cellule T. Il cDNA di RANTES umano codifica per un polipeptide precursore di residui di amminoacidi (aa) altamente basico con un peptide segnale idrofobico di 23 aa che viene scisso per generare la proteina matura di 68 aa. Il RANTES umano mostra circa l'85% di omologia con il RANTES del topo al livello aa dedotto.
RANTES è un potente chemiotattico per numerosi tipi cellulari diversi, tra cui cellule T di memoria CD4+/CD45RO+ non stimolate e cellule T CD4+ e CD8+ stimolate con fenotipi naive e di memoria, cellule NK, basofili, eosinofili, cellule dendritiche, mastociti, monociti e microglia. Oltre ai suoi effetti sulla migrazione, RANTES può attivare numerosi tipi di cellule tra cui cellule T, monociti, neutrofili, cellule NK, cellule dendritiche e astrociti. L'attivazione delle cellule T richiede generalmente concentrazioni di RANTES relativamente elevate (~ 1 μM) e dipende dall'aggregazione della molecola e dall'associazione con i glicosaminoglicani della superficie cellulare (GAG). Se questo [mancano alcune parole, probabilmente 'attività avviene in vivo'] rimane non chiaro sebbene nei topi, i mutanti RANTES iniettati per via intraperitoneale che non sono in grado di aggregare e/o legare GAG, non sono in grado di attrarre leucociti rispetto ai controlli wild-type. Altri studi in vivo mostrano che i topi knockout per RANTES mostrano un carente reclutamento di leucociti nei siti di infiammazione acuta. - È noto che RANTES interagisce con quattro recettori transmembrana accoppiati alle proteine ​​G-identificati: CCR1, CCR3, CCR4 e CCR5 (22-25). La stimolazione RANTES può avviare una varietà di cascate di segnalazione che dipendono dal contesto cellulare. Ad esempio, nelle cellule T-, RANTES può stimolare aumenti di Ca2+ intracellulare e l'attivazione della chinasi di adesione focale (FAK), della proteina chinasi A, PI3-chinasi, Rho GTPasi e delle vie di segnalazione JAK/STAT. La proteina US28 del citomegalovirus presenta una significativa omologia con i recettori delle chemochine CC ed è in grado di legare RANTES. La membrana che attraversa l'US28 può, a seconda del contesto, segnalare in modo costitutivo, legare RANTES e avviare cascate di segnalazione mediate da proteine ​​G, o sequestrare RANTES e potenzialmente alterare le risposte infiammatorie.
Il recettore RANTES CCR5 è anche il co-recettore primario per le varianti R5 (M-tropic) dell'HIV-1. È stato dimostrato che RANTES, così come gli altri ligandi di CCR5, la proteina infiammatoria dei macrofagi (MIP)-1 alfa e MIP-1 beta, possono inibire competitivamente l'interazione CCR5/HIV-1 e sopprimere l'infezione virale in vitro. Apparentemente questi effetti non richiedono una segnalazione completamente intatta da parte del recettore CCR5. Di conseguenza, forme modificate di RANTES e composti non-peptidici che bloccano l'interazione dell'HIV-1 con CCR5 si dimostrano promettenti per terapie future. Al contrario, diversi rapporti mostrano che RANTES può migliorare la replicazione in vitro delle varianti X4 (T-tropic) dell'HIV-1 che utilizzano CXCR4 come co-recettore anziché CCR5. Questa attività di solito richiede concentrazioni di RANTES relativamente elevate (~μM) e dipende dall'interazione con i GAG della superficie cellulare, dall'oligomerizzazione e dall'attivazione delle cascate di segnalazione della tirosina chinasi e della MAP chinasi.

pg/ml	D.O.		Nella media	Corretto
0.00	0.0151	0.0162	0.0157
13.72	0.0271	0.0288	0.0280	0.0123
41.15	0.0489	0.0496	0.0493	0.0336
123.46	0.1175	0.1189	0.1182	0.1025
370.37	0.3486	0.3520	0.3503	0.3346
1111.11	1.0108	0.9250	0.9679	0.9522
3333.33	1.8759	2.0533	1.9646	1.9489
10000.00	3.2985	3.1585	3.2285	3.2128

	Precisione intra-test			Precisione inter-test
Numero del campione	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Media (pg/ml)	426.6	1631.6	3396	702.2	3412	8842.1
Deviazione standard	37.6	128.2	288.6	44.6	194.4	506.5
Coefficiente di variazione(%)	8.8	7.9	8.5	6.4	5.7	5.7

Precisione intra-test (Precisione all'interno di un test) Tre campioni con concentrazione nota sono stati analizzati venti volte su una piastra per valutare la precisione intra-test.

Precisione intra-analisi (precisione tra analisi) Tre campioni con concentrazione nota sono stati analizzati sei volte su una piastra per valutare la precisione intra-analisi.

Il recupero del picco è stato valutato aggiungendo 3 livelli di CCL5 umana a un campione di siero umano sano. Il siero non addizionato è stato utilizzato come bianco in questo esperimento.
Il recupero variava dal 90% al 106% con un recupero medio complessivo del 97%.

Matrice del campione	Campione valutato	Intervallo (pg/ml)	Rilevabile (%)	Media rilevabile (pg/ml)
Siero	30	943.0-38560.8	100	21207.7

Siero/Plasma – In questo test è stata valutata la presenza di CCL5 in trenta campioni provenienti da volontari apparentemente sani. Non erano disponibili le cartelle cliniche dei donatori.