Il suo tag Anticorpo monoclonale di coniglio (ARA796)

Tutte le corsie: anticorpo anti-His tag alla diluizione 1:2.000
MW osservato: dipende dalla proteina di fusione con il suo tag

Corsia 1: proteina di fusione con tag N-terminale 6X His
Corsia 2: proteina di fusione con tag C-terminale 6X His
Corsia 3: proteina di fusione multi-tag contenente 6X tag His
Corsia 4: 293 cellule lisate-trasfettate con il gene marcato N-terminale 6X His
Corsia 5: 293 cellule lisate-trasfettate con il gene marcato con C-terminale 6X His
Corsia 6: proteina di fusione con tag N-terminale 6X His
Corsia 7: proteina di fusione con tag C-terminale 6X His
Corsia 8: lisato cellulare 293 non trasfettato

Lisare a 20 µg per corsia
2° Ab:
GAR HRP(H+L) 1:5.000
Esposizione: anni '60

Istogramma sovrapposto che mostra 293 cellule trasfettate con N-terminale (blu) e C-terminale (rosso) 6X Il suo gene marcato è stato colorato con ARA796. Le cellule sono state quindi incubate nell'anticorpo (ARA796, diluizione 1:1.000) in 1x PBS/1% BSA per 30 minuti a temperatura ambiente. L'anticorpo secondario utilizzato era un Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor^® 488 (IgG H+L) alla diluizione 1:2.000 per 20 minuti a temperatura ambiente. Come controllo è stato utilizzato un campione senza etichetta (nero).

Colorazione ARA796 di 293 cellule trasfettate con il gene N-terminale 6X marcato con His mediante IF/ICC (immunofluorescenza/immunocitochimica). Le cellule sono state fissate con paraformaldeide, permeabilizzate con Triton X-100 allo 0,1% e bloccate con siero di capra al 10% per mezz'ora a temperatura ambiente. I campioni sono stati incubati con l'anticorpo primario (1:10.000) a 4°C. Come anticorpo secondario (1:500) è stato utilizzato un policlonale IgG di capra anti-coniglio coniugato con Alexa Fluor^® 488-. DAPI (blu) è stato utilizzato come controcolorante nucleare.

Controllo: PBS e anticorpo secondario, An Alexa Fluor^® 488-coniugato Goat Anti-Rabbit IgG (1:500).

Colorazione ARA796 di 293 cellule trasfettate con il gene C-terminale 6X marcato con His mediante IF/ICC (immunofluorescenza/immunocitochimica). Le cellule sono state fissate con paraformaldeide, permeabilizzate con Triton X-100 allo 0,1% e bloccate con siero di capra al 10% per mezz'ora a temperatura ambiente. I campioni sono stati incubati con l'anticorpo primario (1:800) a 4°C. Come anticorpo secondario (1:500) è stato utilizzato un policlonale IgG di capra anti-coniglio coniugato con Alexa Fluor^® 488-. DAPI (blu) è stato utilizzato come controcolorante nucleare.

Controllo: PBS e anticorpo secondario, An Alexa Fluor^® 488-coniugato Goat Anti-Rabbit IgG (1:500).

Il suo tag è stato immunoprecipitato da 0,05 mg di 293 lisati di cellule intere trasfettate con il gene N-terminale 6X marcato con ARA796 alla diluizione 1:50.
2° Ab: GAR HRP per IP 1:500

Corsia 1: ARA796 IP in 293 lisati di cellule intere trasfettate con il gene N-terminale 6X con etichetta His
Corsia 2: PBS invece di ARA796 in 293 lisati di cellule intere trasfettate con il gene marcato N-terminale 6X His
Corsia 3: 293 lisati di cellule intere trasfettati con il gene marcato N-terminale 6X His, 10 µg (input)
Esposizione: 20s

Il suo tag è stato immunoprecipitato da 0,2 mg di 293 lisati di cellule intere trasfettate con il gene C-terminal 6X His taggato con ARA796 alla diluizione 1:50.
2° Ab:
GAR HRP per IP 1:500
Corsia 1: IP ARA796 in 293 cellule intere lisate trasfettate con il gene marcato C-terminal 6X His
Corsia 2: PBS invece di ARA796 in 293 cellule intere lisate trasfettate con il gene marcato C-terminal 6X His
Corsia 3: lisato di 293 cellule intere trasfettate con il gene C-terminal 6X His contrassegnato, 10 µg (input)
Esposizione: 120s