Anticorpo monoclonale di coniglio con etichetta HA (ARA782)

MW previsto: dipende dalla proteina di fusione con tag HA
Corsia 1: 293 cellule lisate trasfettate con il gene marcato HA C-terminale (ARA782 alla diluizione 1:2.000).
Corsia 2: 293 cellule lisate trasfettate con il gene marcato HA N-terminale (ARA782 alla diluizione 1:1.000).
Corsia 3: 293 cellule lisate senza alcuna trasfezione (ARA782 alla diluizione 1:400).
Corsia 1: 1 µg per corsia
Corsia 2/3: 10 µg per corsia
2° Ab:
GAR HRP(H+L) 1:5.000
Esposizione: 20s

Istogramma sovrapposto che mostra 293 cellule trasfettate con il gene marcato HA N-terminale (verde) e C-terminale (rosso) colorato con ARA782. Le cellule sono state quindi incubate nell'anticorpo (ARA782, diluizione 1:2.000) in 1x PBS/1% BSA per 30 minuti a temperatura ambiente. L'anticorpo secondario utilizzato era un Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor^® 488 (IgG H+L) alla diluizione 1:2.000 per 20 minuti a temperatura ambiente. Come controllo è stato utilizzato un campione senza etichetta (nero).

Tag HA con colorazione ARA782 in 293 cellule trasfettate con il gene marcato HA N-terminale mediante IF/ICC (immunofluorescenza/immunocitochimica). Le cellule sono state fissate con paraformaldeide, permeabilizzate con Triton X-100 allo 0,1% e bloccate con siero di capra al 10% per mezz'ora a temperatura ambiente. I campioni sono stati incubati con l'anticorpo primario (1:2.000) a 4°C. Come anticorpo secondario (1:500) è stato utilizzato un policlonale IgG di capra anti-coniglio coniugato con Alexa Fluor^® 594-. DAPI (blu) è stato utilizzato come controcolorante nucleare.

Controllo: PBS e anticorpo secondario, An Alexa Fluor^® 594-coniugato Goat Anti-Rabbit IgG (1:500).

Tag HA con colorazione ARA782 in 293 cellule trasfettate con il gene marcato HA C-terminale mediante IF/ICC (immunofluorescenza/immunocitochimica). Le cellule sono state fissate con paraformaldeide, permeabilizzate con Triton X-100 allo 0,1% e bloccate con siero di capra al 10% per mezz'ora a temperatura ambiente. I campioni sono stati incubati con l'anticorpo primario (1:2.000) a 4°C. Come anticorpo secondario (1:500) è stato utilizzato un policlonale IgG di capra anti-coniglio coniugato con Alexa Fluor^® 594-. DAPI (blu) è stato utilizzato come controcolorante nucleare.

Controllo: PBS e anticorpo secondario, An Alexa Fluor^® 594-coniugato Goat Anti-Rabbit IgG (1:500).

Il tag HA è stato immunoprecipitato da 0,2 mg di 293 lisati di cellule intere trasfettate con il gene marcato HA N-terminale con ARA782 alla diluizione 1:10.
2° Ab:
GAR HRP per IP 1:500

Corsia 1: IP ARA782 in 293 lisati di cellule intere trasfettate con il gene marcato HA N-terminale
Corsia 2: PBS invece di ARA782 in 293 lisati di cellule intere trasfettate con il gene marcato HA N-terminale
Corsia 3: 293 lisati di cellule intere trasfettati con il gene marcato HA N-terminale, 10 µg (input)

Esposizione: anni '60

Il tag HA è stato immunoprecipitato da 0,2 mg di 293 lisati di cellule intere trasfettate con il gene marcato HA C-terminale con ARA782 alla diluizione 1:10.
2° Ab:
GAR HRP per IP 1:500

Corsia 1: IP ARA782 in 293 lisati di cellule intere trasfettate con il gene marcato HA C-terminale
Corsia 2: PBS invece di ARA782 in 293 lisati di cellule intere trasfettate con il gene marcato HA C-terminale
Corsia 3: 293 lisati di cellule intere trasfettati con il gene marcato HA C-terminale, 10 µg (input)

Esposizione: anni '60