Anticorpo policlonale di coniglio AP2 alfa/beta

Scheda di sicurezza

AP2 alpha/beta Rabbit Polyclonal Antibody

Caratteristiche principali e dettagli

Anticorpo policlonale di coniglio anti-AP2 alfa/beta

Obiettivo: AP2 alfa/beta
Fonte/Ospite: Coniglio
Reattività: Umano, topo, ratto, pollo, maiale, pecora
Clonalità: Policlonale
Applicazioni: WB, IHC, IF/ICC, ChIP, EMSA
Coniugazione: Non coniugato
Stoccaggio: a-20°C

Marca:

N. CAT. : APA07624

US$ Scegli

Dimensioni:

50μL 100μL

Trail, dimensioni sfuse o richieste personalizzate Vi preghiamo di contattarci

Dettagli del prodotto

Sfondo

Proteina legante il DNA-specifica della sequenza che interagisce con elementi potenziatori virali e cellulari inducibili per regolare la trascrizione di geni selezionati. I fattori AP-2 si legano alla sequenza consenso 5'-GCCNNNGGC-3' e attivano i geni coinvolti in un ampio spettro di importanti funzioni biologiche tra cui il corretto sviluppo dell'occhio, del viso, della parete corporea, degli arti e del tubo neurale. Inoltre sopprimono numerosi geni tra cui MCAM/MUC18, C/EBP alfa e MYC. AP-2-alfa è l'unica proteina AP-2 richiesta per la morfogenesi precoce della vescicola del cristallino. Insieme al coattivatore CITED2, stimola l'attivazione della trascrizione del promotore PITX2 P1. Si associa con la cromatina alla regione del promotore PITX2 P1.

Applicazione

Per garantire prestazioni ottimali del test, AREX consiglia di effettuare una titolazione dei reagenti su misura per ciascun sistema di analisi per ottenere risultati di rilevamento ottimali.

WB	1:500 - 1:1000
IHC	1:100 - 1:200
SE/ICC	1:100 - 1:500
Chip	1:100 - 1:500
EMSA	Utilizzare ad una diluizione dipendente dal dosaggio

*I risultati sono specifici del campione-. Si prega di fare riferimento alle condizioni di analisi locali e ai parametri di test come riferimento.

Panoramica

Descrizione	Anticorpo policlonale di coniglio anti-AP2 alfa/beta
Specificità	Riconosce i livelli endogeni della proteina AP2 alfa/beta.
Tipo di anticorpi	Anticorpo primario
Immunogeno	KLH-peptide sintetico coniugato che comprende una sequenza all'interno della regione C-term dell'AP2 alfa/beta umano. La sequenza esatta è proprietaria.
Purificazione	L'anticorpo è stato purificato mediante cromatografia di affinità immunogena.
Peso Molecolare	Previsto: 48; Osservato: 48 kD
Modulo/Buffer	Liquido in 0,42% fosfato di potassio, 0,87% cloruro di sodio, pH 7,3, 30% glicerolo e 0,01% azoturo di sodio.
Nomi alternativi	TFAP2A; AP2TF; TFAP2; Fattore di trascrizione AP-2-alfa; AP2-alfa; fattore di trascrizione AP-2; Attivazione del potenziatore-proteina legante 2-alfa; Proteina attivatrice 2; AP-2; TFAP2B; Fattore di trascrizione AP-2-beta; AP2-beta; Attivazione del potenziatore-proteina legante 2-beta
Simbolo del gene	TFAP2A; TFAP2B
Entrez Gene	7020(Umano); 21418; 21419(Topo)
SwissProt	P05549; Q92481(Umano); P34056; Q61313(Topo); P58197(Ratto)

*AREX ottimizza continuamente i nostri prodotti. Il contenuto della pagina Web potrebbe non riflettere gli ultimi aggiornamenti. Per domande, contattare info@arexbio.com o il proprio distributore locale.
*Numero clone, reattività, origine/host e clonalità sono reperibili nel nome del prodotto e nella sezione Caratteristiche principali sopra.

Dati

Analisi Western blot dell'espressione di AP2 alfa/beta nei lisati di cellule intere PC3 (A), MCF7 (B), Myla2059 (C). (Dimensione della banda prevista: 48; 50 kD; Dimensione della banda osservata: 48 kD)

Analisi immunoistochimica della colorazione AP2 alfa/beta nella sezione di tessuto incluso in paraffina fissata in formalina di cancro polmonare umano. La sezione è stata pretrattata utilizzando il recupero dell'antigene mediato dal calore con tampone di citrato di sodio (pH 6,0). La sezione è stata quindi incubata con l'anticorpo a temperatura ambiente e rilevata utilizzando un sistema polimerico compatto coniugato con HRP. DAB è stato utilizzato come cromogeno. La sezione è stata quindi controcolorata con ematossilina e montata con DPX.

Analisi immunofluorescente della colorazione AP2 alfa/beta nelle cellule HepG2. Le cellule fissate in formalina-sono state permeabilizzate con Triton X-100 allo 0,1% in TBS per 5-10 minuti e bloccate con BSA-PBS al 3% per 30 minuti a temperatura ambiente. Le cellule sono state sondate con l'anticorpo primario in BSA-PBS al 3% e incubate per una notte a 4°C in una camera umidificata. Le cellule sono state lavate con PBST e incubate con un anticorpo secondario coniugato DyLight 594- (rosso) in PBS a temperatura ambiente al buio.

L'anticorpo anti-AP2 alfa/beta è stato utilizzato in un test EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay) per supershiftare il complesso proteina-DNA. Oligonucleotidi di DNA a doppio filamento radiomarcati (10.000 cpm per corsia) che ospitavano un sito di legame per AP2 alfa/beta sono stati incubati con ciascuno 2 ug di estratto nucleare (NE) da cellule HeLa e Caski, rispettivamente. I campioni sono stati incubati per 30 minuti a temperatura ambiente per consentire la formazione di complessi proteina-DNA. Gli anticorpi anti-AP2 alfa/beta sono stati aggiunti ai campioni (come indicato) e incubati per ulteriori 60 minuti a 4°C. I campioni sono stati separati in una PAGINA al 5,5%. Il Gel è stato essiccato sotto vuoto e per l'autoradiografia una pellicola radiografica è stata esposta con uno schermo intensificatore per 2 giorni a -80°C. Complessi specifici proteina-DNA sono stati supershiftati quantitativamente con l'anticorpo Anti-AP2 alfa/beta, verificando il legame di AP2 alfa/beta all'oligonucleotide del DNA.

Analisi ChIP di lisati di linee cellulari di cancro cervicale, incubate per 12 ore a 4°C. Reticolazione -(X-ChIP) utilizzando formaldeide per 10 minuti. Fase di rilevamento: PCR semiquantitativa. Controllo positivo: linee cellulari tumorali Hela. Controllo negativo: cheratinociti primari umani.

Stoccaggio

Conservare a 4°C per breve termine. Per la conservazione a lungo termine, conservare a -20°C, evitando cicli di gelo/scongelamento.

Nota

Solo per uso di ricerca. Da non utilizzare in procedure diagnostiche.

Domande frequenti

Quali sono i principali tipi di anticorpi di ricerca e in cosa differiscono?

Gli anticorpi di ricerca si dividono principalmente in anticorpi monoclonali e anticorpi policlonali. Gli anticorpi monoclonali offrono tipicamente una specificità più elevata e una migliore consistenza batch-to-batch, mentre gli anticorpi policlonali spesso forniscono un'affinità più forte ma possono mostrare una maggiore variazione tra i lotti. La scelta dipende dalle vostre specifiche esigenze sperimentali.

Come posso sapere se un anticorpo di ricerca è adatto al mio esperimento?

Si consiglia di rivedere attentamente la scheda tecnica del prodotto per applicazioni convalidate, reattività delle specie, diluizioni consigliate e riferimenti pubblicati. Per i nuovi anticorpi, in genere è utile eseguire una validazione su piccola scala con campioni di controllo positivo.

La conservazione impropria degli anticorpi di ricerca può influenzare i risultati sperimentali?

SÌ. Gli anticorpi sono sensibili alla temperatura, ai ripetuti cicli di congelamento/scongelamento e alla contaminazione. Una memorizzazione non corretta può comportare una riduzione dell'attività, un aumento del background o segnali più deboli. È meglio seguire le istruzioni di conservazione fornite nella scheda tecnica del prodotto.

Perché la diluizione consigliata nella scheda tecnica non funziona bene nel mio esperimento?

La diluizione consigliata si basa sulle condizioni di prova del fornitore. Fattori come il tipo di campione, il metodo di fissazione e il sistema di rilevamento del laboratorio possono influenzare la concentrazione di lavoro ottimale. Spesso è necessario eseguire un'ottimizzazione della serie di diluizioni nel proprio sistema.

Quali precauzioni dovrei prendere quando utilizzo per la prima volta un anticorpo di ricerca appena acquistato?

Si consiglia di centrifugare brevemente l'anticorpo (soprattutto quelli concentrati o liofilizzati), quindi eseguire un esperimento pilota su piccola scala utilizzando le condizioni raccomandate. Anche la registrazione del numero di lotto e della data di utilizzo è utile per il monitoraggio futuro.

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