Anticuerpo policlonal de conejo semaforina 4A

Análisis de transferencia Western de la expresión de semaforina 4A en lisados ​​de células completas HEK293T (A), A549 (B), SGC7901 (C). (Tamaño de banda previsto: 83 kD; Tamaño de banda observado: 95 kD)

Análisis inmunohistoquímico de la tinción con semaforina 4A en una sección de tejido embebido en parafina fijado con formalina de cerebro humano. La sección se trató previamente utilizando recuperación de antígeno mediada por calor con tampón citrato de sodio (pH 6,0). Luego, la sección se incubó con el anticuerpo a temperatura ambiente y se detectó usando un sistema de polímero compacto conjugado con HRP. Como cromógeno se utilizó DAB. Luego, la sección se contratiñó con hematoxilina y se montó con DPX.

Análisis inmunofluorescente de la tinción con semaforina 4A en células HeLa. Las células fijadas con formalina se permeabilizaron con Triton X-100 al 0,1% en TBS durante 5-10 minutos y se bloquearon con BSA-PBS al 3% durante 30 minutos a temperatura ambiente. Las células se sondaron con el anticuerpo primario en BSA al 3%-PBS y se incubaron durante la noche a 4 °C en una cámara humidificada. Las células se lavaron con PBST y se incubaron con un anticuerpo secundario conjugado DyLight 594 (rojo) en PBS a temperatura ambiente en la oscuridad. Se utilizó DAPI para teñir los núcleos celulares (azul).

Inmunoprecipitación de semaforina 4A a partir de 0,5 mg de lisado de extracto de células enteras de Jurkat, utilizando 5 ug de anticuerpo anti-Semaphorin 4A y 50 ul de perlas magnéticas de proteína G (+). No se añadió ningún anticuerpo al control (-). El anticuerpo se incubó bajo agitación con perlas de proteína G durante 10 minutos, se añadió a cada muestra lisado de extracto de células completas Jurkat diluido en tampón RIPA y se incubó durante 10 minutos más bajo agitación. Las proteínas se eluyeron mediante la adición de 40 ul de tampón de carga SDS y se incubaron durante 10 minutos a 70°C; Se separaron 10 ul de cada muestra en un gel SDS PAGE, se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa, se bloquearon con BSA al 5 % y se sondaron con anticuerpo anti-semaforina 4A.