Anticuerpo monoclonal de conejo con etiqueta HA (ARB574)

MW previsto: depende de la proteína de fusión con la etiqueta HA
Carril 1: lisado de 293 células transfectadas con el gen marcado con HA C-terminal (a una dilución de 1:2000).
Carril 2: lisado de 293 células transfectadas con el gen marcado con HA N-terminal (a una dilución de 1:1000).
Carril 3: 293 células lisado sin ninguna transfección (a dilución 1:400).
Carril 1: 1 μg por carril
Carril 2/3: 10 μg por carril
2do Ab:
GAR HRP(H+L) 1:5000

Histograma superpuesto que muestra 293 células transfectadas con el gen marcado con HA N-terminal (verde) y C-terminal (rojo) teñido con ARB574. Luego, las células se incubaron en el anticuerpo (ARB574, dilución 1:2000) en 1x PBS/BSA al 1% durante 30 minutos a temperatura ambiente. El anticuerpo secundario utilizado fue un Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) a una dilución 1:2000 durante 20 min a temperatura ambiente. Se utilizó una muestra sin etiquetar (negra) como control.

Histograma superpuesto que muestra 293 células transfectadas con genes marcados con HA N-terminal (verde) y C-terminal (rojo) teñidos con ARB574. Luego, las células se incubaron en el anticuerpo (ARB574, dilución 1:2000) en 1x PBS/BSA al 1% durante 30 minutos a temperatura ambiente. El anticuerpo secundario utilizado fue un Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) a una dilución 1:2000 durante 20 min a temperatura ambiente. Se utilizó como control una muestra sin etiquetar (negra).

Etiqueta HA con tinción ARB574 en 293 células transfectadas con gen marcado con HA N-terminal mediante IF/ICC (inmunofluorescencia/inmunocitoquímica). Las células se fijaron con paraformaldehído, se permeabilizaron con Triton X-100 al 0,1% y se bloquearon con suero de cabra al 10% durante media hora a temperatura ambiente. Las muestras se incubaron con anticuerpo primario (1:2000) a 4°C. Se utilizó un policlonal IgG de cabra anticonejo conjugado con Alexa Fluor® 594 como anticuerpo secundario (1:500). Se utilizó DAPI (azul) como contratinción nuclear. Control: PBS y anticuerpo secundario, IgG de conejo conjugada Alexa Fluor® 594-Cabra Anti-Conejo (1:500).

Etiqueta HA con tinción ARB574 en 293 células transfectadas con gen marcado con HA C-terminal mediante IF/ICC (inmunofluorescencia/inmunocitoquímica). Las células se fijaron con paraformaldehído, se permeabilizaron con Triton X-100 al 0,1% y se bloquearon con suero de cabra al 10% durante media hora a temperatura ambiente. Las muestras se incubaron con anticuerpo primario (1:2000) a 4°C. Se utilizó un policlonal IgG de cabra anticonejo conjugado con Alexa Fluor® 594 como anticuerpo secundario (1:500). Se utilizó DAPI (azul) como contratinción nuclear. Control: PBS y anticuerpo secundario, IgG de conejo conjugada Alexa Fluor® 594-Cabra Anti-Conejo.

La etiqueta HA se inmunoprecipitó a partir de 0,2 mg de lisado de 293 células enteras transfectadas con el gen marcado con HA N-terminal con ARB574 a una dilución 1:10. 2.º Ab: GAR HRP para IP 1:500 Carril 1: ARB574 IP en lisado de células enteras 293 transfectadas con gen marcado con HA N-terminal Carril 2: PBS en lugar de ARB574 en lisado de células enteras 293 transfectadas con gen etiquetado con HA N-terminal Carril 3: lisado de células enteras 293 transfectado con gen etiquetado con HA N-terminal, 10 µg (entrada) Exposición: 60s

La etiqueta HA se inmunoprecipitó a partir de 0,2 mg de lisado de 293 células completas transfectadas con el gen marcado con HA C-terminal con ARB574 a una dilución 1:10. 2.º Ab: GAR HRP para IP 1:500 Carril 1: ARB574 IP en lisado de células completas 293 transfectadas con gen etiquetado con HA C-terminal Carril 2: PBS en lugar de ARB574 en lisado de células completas 293 transfectadas con gen etiquetado con HA C-terminal Carril 3: lisado de células completas 293 transfectado con gen etiquetado con HA C-terminal, 10 µg (entrada) Exposición: 60s