Anticuerpo policlonal de conejo AP2 alfa/beta

Análisis de transferencia Western de la expresión de AP2 alfa/beta en lisados ​​de células completas PC3 (A), MCF7 (B), Myla2059 (C). (Tamaño de banda previsto: 48; 50 kD; Tamaño de banda observado: 48 kD)

Análisis inmunohistoquímico de la tinción alfa/beta de AP2 en una sección de tejido embebido en parafina fijado con formalina de cáncer de pulmón humano. La sección se trató previamente utilizando recuperación de antígeno mediada por calor con tampón citrato de sodio (pH 6,0). Luego, la sección se incubó con el anticuerpo a temperatura ambiente y se detectó usando un sistema de polímero compacto conjugado con HRP. Se utilizó DAB como cromógeno. Luego, la sección se contratiñó con hematoxilina y se montó con DPX.

Análisis inmunofluorescente de tinción AP2 alfa/beta en células HepG2. Las células fijadas con formalina se permeabilizaron con Triton X-100 al 0,1% en TBS durante 5-10 minutos y se bloquearon con BSA-PBS al 3% durante 30 minutos a temperatura ambiente. Las células se sondaron con el anticuerpo primario en BSA al 3%-PBS y se incubaron durante la noche a 4 °C en una cámara humidificada. Las células se lavaron con PBST y se incubaron con un anticuerpo secundario conjugado DyLight 594 (rojo) en PBS a temperatura ambiente en la oscuridad.

El anticuerpo anti-AP2 alfa/beta se utilizó en un ensayo de cambio de movilidad electroforética (EMSA) para superdesplazar el complejo proteína-ADN. Se incubaron oligonucleótidos de ADN bicatenario radiomarcados (10.000 cpm por carril) que albergaban un sitio de unión para AP2 alfa/beta con cada 2 ug de extracto nuclear (NE) de células HeLa y Caski, respectivamente. Las muestras se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente para permitir la formación de complejos proteína-ADN. Se agregaron anticuerpos anti-AP2 alfa/beta a las muestras (como se indica) y se incubaron durante 60 minutos más a 4°C. Las muestras se separaron en un PAGE al 5,5%. El gel se secó al vacío y para la autorradiografía se expuso una película de rayos X con una pantalla intensificadora durante 2 días a 80°C. Los complejos de proteína-ADN específicos se superdesplazaron cuantitativamente con el anticuerpo Anti-AP2 alfa/beta, verificando la unión de AP2 alfa/beta al oligonucleótido de ADN.

Análisis de chip del lisado de líneas celulares de cáncer de cuello uterino, incubado durante 12 horas a 4°C. Reticulación (X-ChIP) usando formaldehído durante 10 minutos. Paso de detección: PCR semicuantitativa. Control positivo: Líneas celulares tumorales Hela. Control negativo: Queratinocitos primarios humanos.