Humanes TNF-α ELISA-Kit

Protokollbroschüre

Hauptmerkmale und Details

Spezifikation: 96 Test
Empfindlichkeit: 0,21 pg/ml (50 μl) ；0,26 pg/ml (10 μl)
Standardkurvenbereich: 1,37~1000 pg/ml
Standardkurvensteigung: 7 Punkte/3 Falten
Anzahl der Inkubationen: 2
Probenvolumen: 50 μl/10 μl
Testtyp: Sandwich Elisa
Betriebsdauer: 120min

Marke:

KAT.-NR. : AEH0002

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Größe:

96T

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Produktdetails

Hintergrund

Der Tumornekrosefaktor Alpha (TNF-alpha), auch bekannt als Cachectin und TNFSF1A, ist der prototypische Ligand der TNF-Superfamilie. Es ist ein pleiotropes Molekül, das eine zentrale Rolle bei Entzündungen, der Entwicklung des Immunsystems, der Apoptose und dem Fettstoffwechsel spielt. TNF-alpha ist auch an einer Reihe von pathologischen Erkrankungen beteiligt, darunter Asthma, Morbus Crohn, rheumatoide Arthritis, neuropathische Schmerzen, Fettleibigkeit, Typ-2-Diabetes, septischer Schock, Autoimmunität und Krebs aa extrazelluläre Domäne (ECD). Innerhalb der ECD teilt Maus-TNF-alpha 95 % der AA-Identität mit der Ratte und 80 % der AA-Identität mit Hunde-, Pferde-, Katzen-, Menschen-, Kaninchen- und Schweine-TNF-alpha. Es wird von einer Vielzahl von Immun-, Epithel-, Endothel- und Tumorzellen produziert. TNF-alpha wird intrazellulär zu einem nichtkovalent verknüpften Homotrimer zusammengesetzt, das auf der Zelloberfläche exprimiert wird. Zelloberflächen-TNF-alpha kann sowohl die Lyse von Tumorzellen und virusinfizierten Zellen induzieren als auch nach der Ligation durch löslichen TNF-RI seine eigene nachgeschaltete Zellsignalisierung erzeugen. Durch die Freisetzung von membrangebundenem TNF-alpha durch TACE/ADAM17 wird das bioaktive Zytokin freigesetzt, ein 55 kDa großes lösliches Trimer, das die extrazelluläre TNF-alpha-Domäne enthält. TNF-alpha bindet das allgegenwärtige 55-60 kDa TNF RI und das hämatopoetische zellgebundene 78-80 kDa TNF RII, die beide auch als Homotrimere exprimiert werden. Sowohl Typ-I- als auch Typ-II-Rezeptoren binden TNF-alpha mit vergleichbarer Affinität und können die NFkB-Aktivierung fördern. Allerdings enthält nur TNF RI eine zytoplasmatische Todesdomäne, die die Aktivierung der Apoptose auslöst. Lösliche Formen beider Rezeptortypen werden in menschliches Serum und Urin freigesetzt und können die biologische Aktivität von TNF neutralisieren.

Typische Daten

pg/ml	Außendurchmesser		Durchschnittlich	Korrigiert
0	0.039	0.0402	0.0396
1.37	0.0588	0.0628	0.0608	0.0212
4.12	0.0819	0.0885	0.0852	0.0456
12.35	0.1693	0.1712	0.1703	0.1307
37.04	0.3876	0.3956	0.3916	0.352
111.11	0.9071	0.9969	0.952	0.9124
333.33	2.4084	2.3694	2.3889	2.3493
1000	4.3651	4.1387	4.2519	4.2123

Präzision

	Intra-Assay-Präzision			Präzision zwischen Assays
Probennummer	S1	S2	S3	S1	S2	S3
Probennummer	22	22	22	6	6	6
Durchschnitt (pg/ml)	13	74.8	215.6	15.3	73.9	323.3
Standardabweichung	0.5	3.1	7.3	0.6	2.8	12.9
Variationskoeffizient (%)	3.7	4.1	3.4	4	3.8	4

Intra-Assay-Präzision (Präzision innerhalb eines Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden zwanzigmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.

Inter-Assay-Präzision (Präzision zwischen Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden sechsmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.

Spike-Wiederherstellung

Die Spike-Erholung wurde durch Zugabe von 3 Konzentrationen von menschlichem TNF-alpha in eine gesunde menschliche Serumprobe bewertet. Das nicht aufgestockte Serum wurde in diesem Experiment als Blindprobe verwendet.

Die Wiederherstellung lag zwischen 95 % und 105 %, mit einer durchschnittlichen Gesamtwiederherstellung von 99 %.

Beispielwerte

Beispielmatrix	Probe ausgewertet	Bereich (pg/ml)	Nachweisbar (%)	Mittelwert der nachweisbaren Menge (pg/ml)
Serum	30	0,63-3,85	100	2.08

Serum/Plasma – Dreißig Proben von scheinbar gesunden Freiwilligen wurden in diesem Test auf das Vorhandensein von IL-10 untersucht. Von den Spendern lagen keine Krankengeschichten vor.

n.d. = nicht-nachweisbar. Proben, die unterhalb der Empfindlichkeit liegen, gelten als nicht nachweisbar.

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