Monoklonaler Kaninchen-Antikörper mit HA-Tag (ARB574)

Vorhergesagtes MW: Abhängig vom Fusionsprotein mit HA-Tag
Spur 1: 293 Zelllysat, transfiziert mit C-terminalem HA-markiertem Gen (bei 1:2.000 Verdünnung).
Spur 2: 293 Zelllysat, transfiziert mit N-terminalem HA-markiertem Gen (bei 1:1.000 Verdünnung).
Spur 3: 293 Zellen lysieren ohne jegliche Transfektion (bei einer Verdünnung von 1:400).
Spur 1: 1 μg pro Spur
Spur 2/3: 10 μg pro Spur
2. Ab:
GAR HRP(H+L) 1:5.000

Überlagerungshistogramm mit 293 Zellen, die mit N-terminalem (Grün) und C-terminalem (Rot) HA-markiertem Gen transfiziert wurden, gefärbt mit ARB574. Die Zellen wurden dann im Antikörper (ARB574, 1:2.000-Verdünnung) in 1x PBS/1 % BSA 30 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert. Der verwendete Sekundärantikörper war Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) in einer Verdünnung von 1:2.000 für 20 Minuten bei Raumtemperatur. Als Kontrolle wurde eine nicht markierte Probe (schwarz) verwendet.

Overlay-Histogramm, das 293 Zellen zeigt, die mit N-terminalem (Grün) und C-terminalem (Rot) HA-markiertem Gen transfiziert wurden, gefärbt mit ARB574. Die Zellen wurden dann im Antikörper (ARB574, 1:2.000-Verdünnung) in 1x PBS/1 % BSA 30 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert. Der verwendete Sekundärantikörper war Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) in einer Verdünnung von 1:2.000 für 20 Minuten bei Raumtemperatur. Als Kontrolle wurde eine nicht markierte Probe (schwarz) verwendet.

ARB574-Färbung des HA-Tags in 293-Zellen, die mit dem N-terminalen HA-markierten Gen durch IF/ICC (Immunfluoreszenz/Immunzytochemie) transfiziert wurden. Die Zellen wurden mit Paraformaldehyd fixiert, mit 0,1 % Triton X-100 permeabilisiert und mit 10 % Ziegenserum eine halbe Stunde lang bei Raumtemperatur blockiert. Die Proben wurden mit primärem Antikörper (1:2.000) bei 4 °C inkubiert. Als sekundärer Antikörper wurde ein Alexa Fluor® 594-konjugiertes Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG-Polyklonal verwendet (1:500). Als nukleare Gegenfärbung wurde DAPI (blau) verwendet. Kontrolle: PBS und sekundärer Antikörper, ein Alexa Fluor® 594-konjugiertes Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG (1:500).

ARB574-Färbung des HA-Tags in 293-Zellen, die mit dem C-terminalen HA-markierten Gen durch IF/ICC (Immunfluoreszenz/Immunzytochemie) transfiziert wurden. Die Zellen wurden mit Paraformaldehyd fixiert, mit 0,1 % Triton X-100 permeabilisiert und mit 10 % Ziegenserum eine halbe Stunde lang bei Raumtemperatur blockiert. Die Proben wurden mit primärem Antikörper (1:2.000) bei 4 °C inkubiert. Als sekundärer Antikörper wurde ein Alexa Fluor® 594-konjugiertes Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG-Polyklonal verwendet (1:500). Als nukleare Gegenfärbung wurde DAPI (blau) verwendet. Kontrolle: PBS und sekundärer Antikörper, ein Alexa Fluor® 594-konjugiertes Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG.

Der HA-Tag wurde aus 0,2 mg des Lysats ganzer 293-Zellen, transfiziert mit dem N-terminalen HA-markierten Gen, mit ARB574 in einer Verdünnung von 1:10 immunpräzipitiert. 2. Ab: GAR HRP für IP 1:500 Spur 1: ARB574 IP in 293-Ganzzelllysat, transfiziert mit N-terminalem HA-markiertem Gen. Spur 2: PBS anstelle von ARB574 in 293-Ganzzelllysat, transfiziert mit N-terminalem HA-markiertem Gen. Spur 3: 293-Ganzzelllysat, transfiziert mit N-terminalem HA-markiertem Gen, 10 μg (Eingabe) Belichtung: 60s

Der HA-Tag wurde aus 0,2 mg Lysat ganzer 293-Zellen, transfiziert mit dem C-terminalen HA-markierten Gen, mit ARB574 in einer Verdünnung von 1:10 immunpräzipitiert. 2. Ab: GAR HRP für IP 1:500 Spur 1: ARB574 IP in 293-Ganzzelllysat, transfiziert mit C-terminal HA-markiertem Gen. Spur 2: PBS anstelle von ARB574 in 293-Ganzzelllysat, transfiziert mit C-terminal HA-markiertem Gen. Spur 3: 293 Ganzzelllysat, transfiziert mit C-terminal HA-markiertem Gen, 10 μg (Eingabe) Belichtung: 60s