İnsan CCL5/RANTES ELISA Kiti

CCL5 olarak da bilinen RANTES (Aktivasyon Üzerine Düzenlenir, Normal T Hücresi Eksprese Edilir ve muhtemelen Salgılanır), kemokinlerin "CC" alt ailesinin bir üyesidir. Lökositleri kemo-çekme ve fonksiyonlarını modüle etme yeteneği sayesinde inflamatuar immün yanıtta birincil bir rol oynar. RANTES'e yönelik cDNA, başlangıçta T hücresine özgü bir dizi olarak çıkarımlı hibridizasyonla keşfedildi. İnsan RANTES cDNA'sı, 68 aa olgun proteini oluşturmak üzere bölünen, 23 aa hidrofobik sinyal peptidine sahip, oldukça bazik 91 amino asit (aa) kalıntılı bir öncü polipeptidi kodlar. İnsan RANTES'i, çıkarsanan aa seviyesinde fare RANTES'iyle yaklaşık %85 ​​homoloji sergiler.
RANTES, uyarılmamış CD4+/CD45RO+ hafıza T hücreleri ve saf ve hafıza fenotiplerine sahip uyarılmış CD4+ ve CD8+ T hücreleri, NK hücreleri, bazofiller, eozinofiller, dendritik hücreler, mast hücreleri, monositler ve mikroglia dahil olmak üzere bir dizi farklı hücre tipi için güçlü bir kemo-çekicidir. RANTES, göç üzerindeki etkilerine ek olarak, T hücreleri, monositler, nötrofiller, NK hücreleri, dendritik hücreler ve astrositler dahil olmak üzere birçok hücre tipini aktive edebilir. T hücresi aktivasyonu genellikle nispeten yüksek RANTES konsantrasyonları (~ 1 μM) gerektirir ve molekülün toplanmasına ve hücre yüzeyi glikozaminoglikanları (GAG'ler) ile birleşmesine bağlıdır. Bunun [bazı kelimeler eksik, muhtemelen 'etkinliğin in vivo olarak meydana geldiği'] belirsizliğini koruyor, ancak farelerde, GAG'ı topaklaştıramayan ve/veya bağlayamayan intraperitoneal olarak enjekte edilen RANTES mutantları, vahşi tip kontrollerle karşılaştırıldığında lökositleri çekme yeteneğine sahip değil. Diğer in vivo çalışmalar, RANTES nakavt farelerinin, akut inflamasyon bölgelerine lökositlerin yetersiz alımı sergilediğini göstermektedir. - RANTES'in tanımlanmış dört yedi transmembran G- proteinine bağlı reseptörle etkileşime girdiği bilinmektedir: CCR1, CCR3, CCR4 ve CCR5 (22-25). RANTES uyarımı, hücre bağlamına bağlı çeşitli sinyalleşme basamaklarını başlatabilir. Örneğin, T- hücrelerinde RANTES, hücre içi Ca2+ artışını ve fokal adezyon kinaz (FAK), protein kinaz A, PI3-kinaz, Rho GTPaz ve JAK/STAT sinyal yollarının aktivasyonunu uyarabilir. Sitomegalovirüs proteini US28, CC kemokin reseptörleri ile önemli bir homoloji sergiler ve RANTES'i bağlama kapasitesine sahiptir. Membran-spanning US28, bağlama bağlı olarak yapısal bir şekilde sinyal verebilir, RANTES'i bağlayabilir ve G-protein-aracılı sinyalleşme basamaklarını başlatabilir veya RANTES'i sekestre edebilir ve potansiyel olarak inflamatuar yanıtları değiştirebilir.
RANTES reseptörü CCR5 aynı zamanda HIV-1'in R5 (M-tropik) varyantları için birincil ortak reseptördür. RANTES'in yanı sıra diğer CCR5 ligandları olan makrofaj inflamatuar protein (MIP)-1 alfa ve MIP-1 beta'nın, CCR5/HIV-1 etkileşimini rekabetçi bir şekilde inhibe edebildiği ve in vitro viral enfeksiyonu baskılayabildiği gösterilmiştir. Görünüşe göre bu etkiler CCR5 reseptöründen tamamen sağlam sinyal almayı gerektirmiyor. Sonuç olarak, HIV-1'in CCR5 ile etkileşimini bloke eden RANTES'in değiştirilmiş formları ve peptit olmayan bileşikler gelecekteki tedaviler için umut vaat etmektedir. Buna karşılık çeşitli raporlar, RANTES'in, CCR5 yerine yardımcı reseptör olarak CXCR4'ü kullanan HIV-1'in X4 (T-tropik) varyantlarının in vitro replikasyonunu artırabildiğini göstermektedir. Bu aktivite genellikle nispeten yüksek RANTES konsantrasyonları (~μM) gerektirir ve hücre yüzeyi GAG'ları ile etkileşime, oligomerizasyona ve tirozin kinaz ve MAP kinaz sinyal kaskadlarının aktivasyonuna bağlıdır.

pg/ml	Aşırı doz		Ortalama	Düzeltildi
0.00	0.0151	0.0162	0.0157
13.72	0.0271	0.0288	0.0280	0.0123
41.15	0.0489	0.0496	0.0493	0.0336
123.46	0.1175	0.1189	0.1182	0.1025
370.37	0.3486	0.3520	0.3503	0.3346
1111.11	1.0108	0.9250	0.9679	0.9522
3333.33	1.8759	2.0533	1.9646	1.9489
10000.00	3.2985	3.1585	3.2285	3.2128

	Test İçi Hassasiyet			Testler Arası Hassasiyet
Örnek Numarası	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Ortalama(pg/ml)	426.6	1631.6	3396	702.2	3412	8842.1
Standart Sapma	37.6	128.2	288.6	44.6	194.4	506.5
Değişim Katsayısı (%)	8.8	7.9	8.5	6.4	5.7	5.7

Tahlil İçi Hassasiyet (Bir tahlil içindeki hassasiyet) Tahlil içi kesinliği değerlendirmek için bilinen konsantrasyondaki üç numune bir plaka üzerinde yirmi kez test edildi.

Tahliller Arası Hassasiyet (Tahliller arası hassasiyet) Tahlil içi hassasiyeti değerlendirmek için bilinen konsantrasyona sahip üç numune, bir plaka üzerinde altı kez test edildi.

Ani artış geri kazanımı, sağlıklı insan serum numunesine 3 düzeyde insan CCL5 eklenerek değerlendirildi. Katkısız serum bu deneyde boş olarak kullanıldı.
İyileşme %90 ile %106 arasında değişiyordu ve genel ortalama iyileşme %97'ydi.

Örnek Matris	Örnek Değerlendirildi	Aralık (pg/ml)	Tespit edilebilir (%)	Tespit Edilebilir Ortalama (pg/ml)
Serum	30	943.0-38560.8	100	21207.7

Serum/Plazma – Görünüşte sağlıklı gönüllülerden alınan otuz örnek bu testte CCL5 varlığı açısından değerlendirildi. Donörlerin tıbbi geçmişi mevcut değildi.