Eksozom Ekstraksiyon ve Saflaştırma Kiti (Serum-Plazma)

Eksozomlar, serum/plazmada bol miktarda bulunan, hücreler tarafından salgılanan RNA ve proteini içeren küçük keseciklerdir (30-150 nm). Eksozomların, hücreler arası haberci işlevine sahip olduğu, efektörlerini veya sinyal moleküllerini belirli hücreler arasında ilettiği düşünülmektedir.

Eksozomun biyolojik fonksiyonel çalışmasında, onun tüm parçacıklarının ayrılması gerekir. Umbio tarafından bağımsız olarak geliştirilen Serum/Plazma Eksozom Hızlı Ekstraksiyon Kiti, bileşenlerin optimizasyonundan sonra serum/plazmadaki eksozomun ekstraksiyonu için uygundur. Elde edilmesine yardımcı olur yüksek-saflık eksozomal parçacıklar hızlı ve verimli bir şekilde.

Yüksek - hızlı santrifüj (12000 rpm'ye kadar dönüş hızı ile), vorteks osilatörü; 1,5 mL santrifüj tüpü, PBS tampon çözeltisi, buz makinesi.

* Nükleaz-içermez, Steril

• · Hücre süpernatanını, dokuyu, idrarı, serumu, plazmayı, sütü vb. kapsar.
• · Benzer ürünlere göre 5 kata kadar yüksek numune işleme kapasitesi.
• · Eksozomlar hücre ortak kültürü ve omik araştırmaları için kullanılabilir.
• · Araştırma ve geliştirme için eksozom kitlerinin sürekli optimizasyonuna adanmıştır.
• · 300'den fazla müşterinin güvendiği, sorunsuz satın alma ve kullanımın garanti edildiği.
• · Maliyetlerden tasarruf ederken büyük-ölçekli araştırmaları desteklemek için uygun maliyetli.

I. Numune Ön İşlemi

1. Santrifüj, kullanımdan önce 4°C'de 10 dakika süreyle önceden soğutulacaktır;

2. Numune alma: Dondurulmuş bir numune durumunda, buzdolabından çıkarıldıktan sonra 2-8°C sıcaklıkta çözdürün; Taze bir numune olması durumunda toplandıktan sonra 2-8°C'de saklayın.

3. Numuneyi 500 μL/tüp'e göre alt paketleyin ve yetersiz kısmı 1 × PBS ile 500 μL'ye tamamlayın.

II Saf Olmayan Protein Giderimi

1. Çıkardıktan sonra Çözüm A Kitten çıkarın, en az 1 saat boyunca buzdolabının dondurucu katmanına koyun. Çıkar Çözelti A'yı önceden soğutun ve kırıntılı buzların üzerine yerleştirin;

2. Ekleme Çözüm A: 400μL ekleyin önceden soğutulmuş Çözüm A 500μL kan örneğine ekleyin ve hemen santrifüj tüpünü sıkıca kapatın ve vorteks osilatörünü kullanarak 30 saniye boyunca tamamen karıştırın;

3. Proteini çıkarmak için santrifüjleme: numunedeki saf olmayan proteini çıkarmak için eşit şekilde karıştırılmış numuneyi 4°C'de 12000 rpm'de 20 dakika boyunca santrifüjleyin;

4. Süpernatantı aktarma: saf olmayan proteinleri çıkarılmış olan santrifüjlenmiş süpernatantı yeni bir 1,5 mL'lik santrifüj tüpüne aktarın;

III Eksozom Ekstraksiyonu

1. Ekleme Çözüm B: 120 ekleμL Çözüm B saf olmayan proteinleri uzaklaştırılmış olan santrifüjlenmiş süpernatanta;

2. Çözeltiyi karıştırma: ekledikten sonra Çözüm B, santrifüj tüpünü sıkıca kapatın ve vorteks osilatörünü kullanarak 2 dakika boyunca tamamen karıştırın. Daha sonra oda sıcaklığında 5 dakika bekletin;

3. Eksozomun çökeltilmesi: Santrifüj tüpünü karışık çözeltiyle 4°C'de 12000 rpm'de 15 dakika boyunca santrifüjleyin ve süpernatantı atın;

4. Tekrar santrifüjleme: santrifüj tüpünü çökelterek 4°C'de 12000 rpm'de 2 dakika boyunca santrifüjleyin ve süpernatantı atın. (not: süpernatan mümkün olduğu kadar emilecektir). 1,5 mL santrifüj tüpünü oda sıcaklığında açık bırakın için 10 dakika;

5. Eksozomun yeniden süspanse edilmesi: 200μL 1×PBS alın ve santrifüjlenmiş çökeltiyi eşit şekilde döndürün. Çözüldükten sonra yeniden süspanse edilen çözeltiyi yeni bir 1,5 mL santrifüj tüpüne aktarın;

6. Eksozomal parçacıkların elde edilmesi: 1,5 mL santrifüj tüpünü yeniden süspanse edilmiş çözeltiyle 4°C'de 12000 rpm'de 2 dakika boyunca santrifüjleyin ve süpernatantı saklayın. Bu süpernatan eksozomal parçacıklar açısından zengindir.

(Not: Bu noktada büyük miktarda çökelti oluşabilir ve bu normal bir durumdur)

IV Eksozom Saflaştırması

1. Eksozomun saflaştırılması: Eksozomal parçacıkların elde edilen ham ürününü Eksozom Arıtma Filtresinin üst bölmesine aktarın (EPF sütunu) ve 20 dakika boyunca 5600 rpm'de 4°C'de santrifüjleyin. Santrifüjden sonra EPF kolonunun altındaki sıvıyı toplayın. Bu sıvı saflaştırılmış eksozomal parçacıklardır; (Not: EPF sütunları yeniden kullanılamaz)

2. Eksozomun saklanması: saflaştırılmış eksozomlar 50-100μL'de alt-paketlenecek ve sonraki deneysel kullanım için -80°C'de düşük-sıcaklıktaki bir buzdolabında saklanacaktır.

V Saklama Koşulları

Ürünü aldıktan sonra reaktifleri ayrı olarak saklayın. Lütfen kullanmadan önce iyice karıştırın.

Çözüm A: oda sıcaklığında taşıyın ve kit açıldıktan sonra -18°C'de saklayın (geleneksel bir buzdolabının dondurucu katmanı);

Çözüm B: oda sıcaklığında saklayın;

EPF kolonu: oda sıcaklığında saklayın;

Önlemler

Bu ürün yalnızca yaşam bilimi araştırmaları içindir!

VI Diğer Öğeler

Daha fazla teknik soru ve yanıt için lütfen Umbio ile iletişime geçin.