DYKDDDDK etiketi Tavşan Monoklonal Antikoru (ARA797)

Tahmini MW: DYKDDDDK etiketli füzyon proteinine bağlıdır
Şerit 1: ile transfekte edilmiş 293 hücre lizatı
C-terminal DYKDDDDK etiketli gen (1:20.000 seyreltide).
Şerit 2: ile transfekte edilmiş 293 hücre lizatı
N-terminal DYKDDDDK etiketli gen (1:10.000 seyreltide).
Şerit 3: 293 hücre herhangi bir transfeksiyon olmadan lizatlanır (1:2.000 seyreltide ARA797).
Şerit 4: Çoklu etiketli füzyon proteini (1:2.000 seyreltide)
Şerit 1/2/3: şerit başına 3 µg
Şerit 4: Şerit başına 20 ng
2.Ab:
GAR HRP(H+L) 1:5.000

DYKDDDDK etiketi, 1:50 seyreltmede ARA797 ile N-terminal DYKDDDDK etiketli gen ile transfekte edilmiş 0.1 mg 293 tam hücre lizatından immüno-çökeltildi.
2.Ab:
IP 1:500 için GAR HRP
Şerit 1: N-terminal DYKDDDDK etiketli gen ile transfekte edilmiş 293 tam hücre lizatındaki ARA797 IP
Şerit 2: N-terminal DYKDDDDK etiketli gen ile transfekte edilmiş 293 tam hücre lizatında ARA797 yerine PBS
Şerit 3: N-terminal DYKDDDDK etiketli gen ile transfekte edilmiş 293 tam hücre lizatı, 2 µg (girdi)
Pozlama: 30s

IF/ICC (immünofloresan/immünositokimya) ile N-terminal DYKDDDDK etiketli gen ile transfekte edilmiş 293 hücrede ARA797 boyama DYKDDDDK etiketi. Hücreler paraformaldehid ile sabitlendi, %0.1 Triton X-100 ile geçirgenleştirildi ve oda sıcaklığında yarım saat boyunca %10 keçi serumu ile bloke edildi. Numuneler, 4°C'de birincil antikorla (1:10.000) inkübe edildi. İkincil antikor olarak bir Alexa Fluor® 488-konjuge Keçi Anti-Tavşan IgG poliklonal kullanıldı (1:500). DAPI (mavi) nükleer karşı leke olarak kullanıldı.
Kontrol: PBS ve ikincil antikor, Bir Alexa Fluor® 488-konjuge Keçi Anti-Tavşan IgG (1:500).

IF/ICC (immünofloresan/immünositokimya) ile C-terminal DYKDDDDK etiketli gen ile transfekte edilmiş 293 hücrede ARA797 boyama DYKDDDDK etiketi. Hücreler paraformaldehid ile sabitlendi, %0.1 Triton X-100 ile geçirgenleştirildi ve oda sıcaklığında yarım saat boyunca %10 keçi serumu ile bloke edildi. Numuneler, 4°C'de birincil antikorla (1:10.000) inkübe edildi. İkincil antikor olarak bir Alexa Fluor® 488-konjuge Keçi Anti-Tavşan IgG poliklonal kullanıldı (1:500). DAPI (mavi) nükleer karşı leke olarak kullanıldı.
Kontrol: PBS ve ikincil antikor, Bir Alexa Fluor® 488-konjuge Keçi Anti-Tavşan IgG (1:500).

ARA797 (Kırmızı) ile boyanmış N-terminal DYKDDDDDK etiketli gen ile transfekte edilmiş 293 hücreyi gösteren katman histogramı. Hücreler %4 paraformaldehid ile sabitlendi (10 dakika) ve ardından 15 dakika boyunca %0.1 TritonX-100 ile geçirgenleştirildi. Hücreler daha sonra oda sıcaklığında 30 dakika boyunca 1x PBS/%1 BSA içindeki antikorda (ARA797, 1:2,000 seyreltme) inkübe edildi. Kullanılan ikincil antikor, oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 1:2.000 seyreltide bir Keçi Anti-Tavşan Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) idi. Etiketlenmemiş numune (Siyah) kontrol olarak kullanıldı.

ARA797 (Kırmızı) ile boyanmış C-terminal DYKDDDDDK etiketli gen ile transfekte edilmiş 293 hücreyi gösteren katman histogramı. Hücreler %4 paraformaldehid ile sabitlendi (10 dakika) ve ardından 15 dakika boyunca %0.1 TritonX-100 ile geçirgenleştirildi. Hücreler daha sonra oda sıcaklığında 30 dakika boyunca 1x PBS/%1 BSA içindeki antikorda (ARA797, 1:2,000 seyreltme) inkübe edildi. Kullanılan ikincil antikor, oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 1:2.000 seyreltide bir Keçi Anti-Tavşan Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) idi. Etiketlenmemiş numune (Siyah) kontrol olarak kullanıldı.