Vimentin kanin monoklonal antikropp (ARA732)

Alla banor: Anti-Vimentin-antikropp vid 1:5 000 spädning
Förutspådd MW: 54 kDa
Observerad MW: 54 kDa

Bana 1: Hela
Bana 2: HEK293
Fil 3: A549
Bana 4: 3T3

Lysat vid 10 μg per bana
2:a Ab:
G&R HRP(H+L) 1:10 000

Exponering: 100s

Alla banor: Anti-Vimentin-antikropp vid 1:5 000 spädning
Förutspådd MW: 54 kDa
Observerad MW: 54 kDa

Bana 1: Mu Heart
Bana 2: Rat Heart

Lysat vid 10 μg per bana
2:a Ab:
G&R HRP(H+L) 1:10 000

Exponering: 20s

Immunhistokemi (Formalin/PFA-fixerad paraffin-inbäddade sektioner) analys av human kolonvävnad som märker vimentin med ARA732 vid 1:100. Värmemedierad antigenåtervinning utfördes med användning av Tris/EDTA-buffert pH 9,0.

Överlagringshistogram som visar Hela-celler färgade med ARA732 (blå). Cellerna fixerades med 4% paraformaldehyd (10 min) och permeabiliserades sedan med 0,1% TritonX-100 under 15 min. Cellerna inkuberades sedan i antikroppen (ARA732, 1:10 spädning) i 1x PBS/1 % BSA under 30 minuter vid 4°C. Den sekundära antikroppen som användes var en Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) vid 1:2 000 utspädning under 20 minuter vid 4°C. Omärkt prov (rött) användes som kontroll.

ARA732-färgning av Vimentin i Hela-celler med IF/ICC (immunofluorescens/Immunocytokemi). Celler fixerades med paraformaldehyd, permeabiliserades med 0,1 % Triton X-100 och blockerades med 10 % getserum under en halvtimme vid rumstemperatur. Prover inkuberades med primär antikropp (1:2 000) vid 4°C. En Alexa Fluor® 488-konjugerad Goat Anti-Rabbit IgG polyklonal användes som den sekundära antikroppen (1:500). DAPI (blå) användes som den nukleära motfärgningen.
Kontroll: PBS och sekundär antikropp, en Alexa Fluor® 488-konjugerad Goat Anti-Rabbit IgG (1:500).

Vimentin immunutfälldes från 0,4 mg Hela-lysat med ARA732 vid 1:20 utspädning.
2:a Ab:
GAR HRP för IP 1:500
Spår 1: ARA732 IP i Hela helcellysat
Bana 2: Kanin IgG istället för ARA732 i Hela helcellysat
Spår 3: Hela helcellslysat, 10 μg (ingång)
Exponering: 60-tal