Anticorpo monoclonal de coelho vimentina (ARA738)

Todas as pistas: Anticorpo Anti-Vimentina na diluição 1:2.000
Tamanho de banda previsto: 54 kDa
Tamanho de banda observado: 54 kDa
Pista 1: Hela
Pista 2: SW480
Pista 3: HEK293
Pista 4: A549
Pista 5: NIH/3T3

Lisados a 10 μg por pista.
2º AB:
GARHRP(H+L) 1:5.000
Exposição: 120s

Análise imuno-histoquímica (Formalina/PFA - parafina fixa - seções incorporadas) de tecido Conlon humano marcando Vimentina com ARA738 a 1:1.000. A recuperação antigênica mediada por calor foi realizada utilizando tampão Tris/EDTA pH 9,0.

Anti-Vimentin foi imunoprecipitado a partir de 0,4mg de lisado Hela com ARA738 na diluição 1:50.
2º AB:
GAR HRP para IP 1:10.000

Pista 1: ARA738 IP em lisado de células inteiras Hela
Pista 2: IgG de coelho em vez de ARA738 no lisado de células inteiras Hela
Lane3: lisado de células inteiras Hela, 10 µg (entrada)

Exposição: anos 60

Histograma de sobreposição mostrando células Hela coradas com ARA738 (vermelho). As células foram fixadas com paraformaldeído a 4% (10 min) e depois permeabilizadas com TritonX - 100 a 0,1% durante 15 min. As células foram então incubadas no anticorpo (ARA738, diluição 1:500) em 1x PBS/BSA a 1% durante 30 min a 4°C. O anticorpo secundário utilizado foi um Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor^® 488 (IgG H+L) na diluição 1:2.000 por 20 min a 4°C. Amostra não marcada (preta) foi usada como controle.

Coloração ARA738 com Vimentina em células Hela por IF/ICC (Imunocitoquímica/imunofluorescência). As células foram fixadas com paraformaldeído, permeabilizadas com Triton X-100 a 0,1% e bloqueadas com soro de cabra a 10% durante meia hora à temperatura ambiente. As amostras foram incubadas com anticorpo primário (1:25.000) a 4°C. Um policlonal IgG de cabra anti-coelho conjugado com Alexa Fluor® 488- foi usado como anticorpo secundário (1:500). DAPI (azul) foi usado como contra-coloração nuclear.
Controle: PBS e anticorpo secundário, An Alexa Fluor^® 488-conjugated Goat Anti-Rabbit IgG(1:500).