Anticorpo Policlonal de Coelho PERK

Análise de Western blot da expressão de PERK em lisados ​​​​de células inteiras A549 (A), HepG2 (B). (Tamanho de banda previsto: 125 kD; Tamanho de banda observado: 125 kD)

Análise imuno-histoquímica da coloração PERK em seção de tecido embebido em parafina fixada em formalina de cérebro humano. A seção foi pré-tratada usando recuperação antigênica mediada por calor com tampão citrato de sódio (pH 6,0). A secção foi então incubada com o anticorpo à temperatura ambiente e detectada utilizando um sistema de polímero compacto conjugado com HRP. DAB foi usado como cromógeno. A seção foi então contrastada com hematoxilina e montada com DPX.

Análise imunofluorescente da coloração PERK em células HeLa. As células fixadas em formalina foram permeabilizadas com Triton X-100 a 0,1% em TBS durante 5-10 minutos e bloqueadas com BSA-PBS a 3% durante 30 minutos à temperatura ambiente. As células foram sondadas com o anticorpo primário em 3% de BSA - PBS e incubadas durante a noite a 4 ° C numa câmara humidificada. As células foram lavadas com PBST e incubadas com um anticorpo secundário conjugado DyLight 594-(vermelho) em PBS à temperatura ambiente no escuro. DAPI foi usado para corar os núcleos das células (azul).

Imunoprecipitação de PERK a partir de 0,5mg de lisado de extrato de células inteiras Hela, usando 5ug de Anticorpo Anti-PERK e 50ul de esferas magnéticas de proteína G (+). Nenhum anticorpo foi adicionado ao controle (-). O anticorpo foi incubado sob agitação com esferas de Proteína G durante 10 minutos, o lisado de extrato de células inteiras Hela diluído em tampão RIPA foi adicionado a cada amostra e incubado durante mais 10 minutos sob agitação. As proteínas foram eluídas pela adição de 40 μl de tampão de carga SDS e incubadas durante 10 min a 70°C; 10ul de cada amostra foram separados em gel SDS PAGE, transferidos para uma membrana de nitrocelulose, bloqueados com BSA a 5% e sondados com Anticorpo Anti-PERK.