Anticorpo monoclonal de coelho PD-L1 (ARA730)

Todas as pistas: Anticorpo Anti-PD-L1 na diluição 1:5.000
MW previsto: 33 kDa
PM observado: 40-50 kDa

Pista 1: Superexpressão HEK293 de HuPD-L1
Pista 2: HEK293

Lisados a 5 μg por pista
2º AB:
GARHRP(H+L) 1:10.000
Exposição: 100s

Análise imuno-histoquímica (formalina/PFA - parafina fixa - seções incorporadas) de tecido de adenocarcinoma de pulmão humano marcando PD - L1 com ARA730 a 1:200. A recuperação antigênica mediada por calor foi realizada utilizando tampão Tris/EDTA pH 9,0.

Coloração ARA730 de células 293 transfectadas com gene PD-L1 por IF/ICC (imunofluorescência/imunocitoquímica). As células foram fixadas com paraformaldeído, permeabilizadas com Triton X-100 a 0,1% e bloqueadas com soro de cabra a 10% durante meia hora à temperatura ambiente. As amostras foram incubadas com anticorpo primário (1:10.000) a 4°C. Um policlonal IgG de cabra anti-coelho conjugado com Alexa Fluor® 488- foi usado como anticorpo secundário (1:500). DAPI (azul) foi usado como contra-coloração nuclear.
Controle: PBS e anticorpo secundário, um Alexa Fluor® 488-conjugado Goat Anti-Rabbit IgG (1:500).

Histograma de sobreposição mostrando células 293 transfectadas com gene PD-L1 coradas com ARA730. As células foram então incubadas no anticorpo (ARA730, diluição 1:200) em 1x PBS/BSA a 1% durante 30 min à temperatura ambiente. O anticorpo secundário utilizado foi um Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) na diluição 1:2.000 por 20 min em temperatura ambiente. Amostra não marcada (preta) foi usada como controle.

PD-L1 foi imunoprecipitado a partir de 0,2mg de lisado de 293 células inteiras transfectadas com gene PD-L1 com ARA730 na diluição de 1:30.

2º Ab: GAR HRP para IP 1:500

Pista 1: ARA730 IP em lisado de células inteiras 293 transfectadas com gene PD-L1

Pista 2: PBS em vez de ARA730 em lisado de células inteiras 293 transfectadas com gene PD-L1

Pista 3: 293 lisado de células inteiras transfectadas com gene PD-L1, 2 μg (entrada)

Exposição: 10s