Kit TNF-α ELISA de rato

Livreto de Protocolo

Principais recursos e detalhes

Especificação: 96 Teste
Sensibilidade: 0,097 pg/ml (10 μl)
Faixa de curva padrão: 1,37~1000pg/ml
Gradiente de curva padrão: 7 pontos/3 dobras
Número de incubações: 2
Volume de amostra: 10 μl
Tipo de ensaio: Sanduíche Elisa
Duração da Operação: 120 minutos

Marca:

GATO.NÃO. : AEM0010

US$ Por favor escolha

Tamanho:

96T

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Detalhes do produto

Plano de fundo

O fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), também conhecido como cachectina e TNFSF1A, é o ligante prototípico da superfamília do TNF. É uma molécula pleiotrópica que desempenha um papel central na inflamação, no desenvolvimento do sistema imunológico, na apoptose e no metabolismo lipídico. O TNF-alfa também está envolvido em diversas condições patológicas, incluindo asma, doença de Crohn, artrite reumatóide, dor neuropática, obesidade, diabetes tipo 2, choque séptico, autoimunidade e câncer. - O TNF-alfa de camundongo é sintetizado como uma proteína transmembrana tipo II de 26 kDa que consiste em um domínio citoplasmático de 35 aminoácidos (aa), um segmento transmembranar de 21 aa e um domínio extracelular (ECD) de 179 aa. Dentro do ECD, o TNF-alfa de camundongo compartilha 95% de identidade aa com rato e 80% de identidade aa com TNF-alfa canino, equino, felino, humano, coelho e suíno. É produzido por uma ampla variedade de células imunológicas, epiteliais, endoteliais e tumorais. O TNF-alfa é montado intracelularmente para formar um homotrímero ligado de forma não covalente que é expresso na superfície celular. O TNF-alfa da superfície celular pode induzir a lise de células tumorais e células infectadas por vírus e gerar sua própria sinalização celular a jusante após ligação por TNF RI solúvel. A eliminação do TNF-alfa ligado à membrana pelo TACE/ADAM17 libera a citocina bioativa, um trímero solúvel de 55 kDa contendo o domínio extracelular do TNF-alfa. - O TNF-alfa liga-se ao onipresente TNF RI de 55-60 kDa e ao TNF RII de 78-80 kDa restrito às células hematopoiéticas, ambos também expressos como homotrímeros. Ambos os receptores tipo I e tipo II ligam-se ao TNF-alfa com afinidade comparável e podem promover a ativação do NFkB. Contudo, apenas o TNF RI contém um domínio de morte citoplasmático que desencadeia a activação da apoptose. As formas solúveis de ambos os tipos de caridade são liberadas no soro e na urina humanos e podem neutralizar a atividade biológica do TNF.

Dados típicos

pg/ml	OD		Média	Corrigido
0.00	0.0121	0.0111	0.0116
1.37	0.0242	0.0223	0.0233	0.0117
4.12	0.0482	0.0444	0.0463	0.0347
12.35	0.1134	0.1092	0.1113	0.0997
37.04	0.3165	0.3032	0.3099	0.2983
111.11	0.8042	0.7996	0.8019	0.7903
333.33	1.9672	1.9564	1.9618	1.9502
1000.00	4.1683	4.2715	4.2199	4.2083

Precisão

	Precisão intra-ensaio			Precisão Inter-ensaio
Número da amostra	S1	S2	S3	S1	S2	S3
Número da amostra	22	22	22	6	6	6
Média (pg/ml)	16.1	80.4	271.7	14	75.2	236.7
Desvio Padrão	1.1	4.8	16	0.3	4	10.8
Coeficiente de Variação (%)	6.5	5.9	5.9	2	5.3	4.6

Precisão intraensaio (Precisão dentro de um ensaio) Três amostras de concentração conhecida foram testadas vinte vezes em uma placa para avaliar a precisão intraensaio.

Precisão Interensaio (Precisão entre ensaios) Três amostras de concentração conhecida foram testadas seis vezes em uma placa para avaliar a precisão intraensaio.

Recuperação de pico

A recuperação do pico foi avaliada adicionando 3 níveis de TNF alfa de camundongo em amostra de soro de camundongo. O soro não enriquecido foi utilizado como branco nesta experiência.

A recuperação variou de 107% a 132%, com uma recuperação média global de 116%.

Valores de amostra

Matriz de Amostra	Amostra avaliada	Faixa (pg/ml)	Detectável (%)	Média de detectável (pg/ml)
Soro	30	nd-0,28	33	0.16

Soro/Plasma – Trinta amostras de camundongos aparentemente saudáveis foram avaliadas quanto à presença de TNF alfa neste ensaio. Nenhum histórico médico estava disponível para os doadores.

s.d. = não-detectável. Amostras medidas abaixo da sensibilidade são consideradas não detectáveis.

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