Kit CCL5/RANTES ELISA para ratos

RANTES (Regulado na ativação, expresso em células T normais e presumivelmente secretado), também conhecido como CCL5, é um membro da subfamília "CC" de quimiocinas. Desempenha um papel fundamental na resposta imune inflamatória através de seu - capacidade de quimioatrair leucócitos e modular sua função. O cDNA para RANTES foi inicialmente descoberto por hibridização subtrativa como uma sequência específica de células T. O ADNc da RANTES humana codifica um polipéptido precursor de resíduos de 91 aminoácidos (aa) altamente básico com um péptido sinal hidrofóbico de 23 aa que é clivado para gerar a proteína madura de 68 aa. A RANTES humana exibe aproximadamente 85% de homologia com a RANTES de ratinho ao nível de aa deduzido. - RANTES é um quimioatraente potente para vários tipos de células diferentes, incluindo células T de memória CD4+/CD45RO+ não estimuladas e células T CD4+ e CD8+ estimuladas com fenótipos virgens e de memória, células NK, basófilos, eosinófilos, células dendríticas, mastócitos, monócitos e microglia. Além dos seus efeitos na migração, a RANTES pode ativar vários tipos de células, incluindo células T, monócitos, neutrófilos, células NK, células dendríticas e astrócitos. A ativação de células T geralmente requer concentrações relativamente altas de RANTES (~ 1 μM) e depende da agregação da molécula e da associação com glicosaminoglicanos (GAGs) da superfície celular. Ainda não está claro se esta atividade ocorre in vivo, embora em camundongos, mutantes de RANTES injetados intraperitonealmente que são incapazes de agregar e/ou ligar GAG, não sejam capazes de atrair leucócitos quando comparados com controles de tipo selvagem. Outros estudos in vivo mostram que camundongos knockout para RANTES apresentam recrutamento deficiente de leucócitos para locais de inflamação aguda. - Sabe-se que a RANTES interage com quatro receptores acoplados à proteína G transmembrana identificados: CCR1, CCR3, CCR4 e CCR5 (22-25). A estimulação da RANTES pode iniciar uma variedade de cascatas de sinalização que dependem do contexto celular. Por exemplo, em células T-, a RANTES pode estimular elevações de Ca2+ intracelular e ativação de vias de sinalização quinase de adesão focal (FAK), proteína quinase A, PI3-quinase, Rho GTPase e JAK/STAT. A proteína US28 do citomegalovírus apresenta homologia significativa com receptores de quimiocinas CC e é capaz de se ligar à RANTES. A membrana US28 pode, dependendo do contexto, sinalizar de maneira constitutiva, ligar a RANTES e iniciar cascatas de sinalização mediadas pela proteína G, ou sequestrar a RANTES e potencialmente alterar as respostas inflamatórias. - O receptor CCR5 da RANTES também é o co-receptor primário para variantes R5 (M-trópicas) do HIV-1. Foi demonstrado que a RANTES, bem como os outros ligantes CCR5, proteína inflamatória de macrófagos (MIP)-1 alfa e MIP-1 beta, podem inibir competitivamente a interação CCR5/HIV-1 e suprimir a infecção viral in vitro. Estes efeitos aparentemente não requerem sinalização totalmente intacta do receptor CCR5. Consequentemente, formas modificadas de RANTES e compostos não peptídicos que bloqueiam a interação do HIV-1 com o CCR5 mostram-se promissores para terapias futuras. Em contraste, vários relatórios mostram que a RANTES pode aumentar a replicação in vitro de variantes X4 (T-trópicas) do VIH-1 que utilizam CXCR4 como co-receptor em vez de CCR5. Esta atividade geralmente requer concentrações relativamente altas de RANTES (~ μM) e depende da interação com GAGs da superfície celular, oligomerização e ativação de cascatas de sinalização de tirosina quinase e MAP quinase.

pg/ml	OD		Média	Corrigido
0.00	0.0109	0.0120	0.0115
6.86	0.0222	0.0229	0.0226	0.0111
20.58	0.0490	0.0479	0.0485	0.0370
61.73	0.1153	0.1077	0.1115	0.1001
185.19	0.3341	0.3222	0.3282	0.3167
555.56	1.0620	1.0130	1.0375	1.0261
1666.67	2.8860	2.8410	2.8635	2.8521
5000.00	4.3489	4.3304	4.3397	4.3282

	Precisão intra-ensaio			Precisão Inter-ensaio
Número da amostra	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Média (pg/ml)	111.7	647.3	1815.5	107.4	516	1760.2
Desvio Padrão	7.4	43.1	130.2	6.6	25.8	86.3
Coeficiente de Variação (%)	6.6	6.7	7.2	6.1	5	4.9

Precisão intraensaio (Precisão dentro de um ensaio) Três amostras de concentração conhecida foram testadas vinte vezes em uma placa para avaliar a precisão intraensaio.

Precisão Interensaio (Precisão entre ensaios) Três amostras de concentração conhecida foram testadas seis vezes em uma placa para avaliar a precisão intraensaio.

A recuperação do pico foi avaliada adicionando 3 níveis de CCL5 de camundongo em amostra de soro de camundongo saudável. O soro não enriquecido foi utilizado como branco nesta experiência.
A recuperação variou de 99% a 125%, com uma recuperação média global de 116%.

Matriz de Amostra	Amostra avaliada	Faixa (pg/ml)	Detectável (%)	Média de detectável (pg/ml)
Soro	30	15,09-64,56	100	37.12

Soro/Plasma – Trinta amostras de camundongos aparentemente saudáveis foram avaliadas quanto à presença de CCL5 neste ensaio. Nenhum histórico médico estava disponível para os doadores. s.d. = não-detectável. Amostras medidas abaixo da sensibilidade são consideradas não detectáveis.