L-Lactyl-Histone H3 (Lys18) Anticorpo monoclonal de coelho (ARA873)-Classe ChIP

Ficha técnica

FISPQ

L-Lactyl-Histone H3 (Lys18) Rabbit Monoclonal Antibody(ARA873)-ChIP Grade

Principais recursos e detalhes

Alvo: L-Lactil-Histone H3 (Lys18)
Anfitrião: Coelho
Reatividade: Humano, Rato
Clonalidade: Monoclonal
Aplicação: WB, chip, corte e etiqueta
Armazenamento: -20°C

Marca:

GATO.NÃO. : ARA6699

US$ Por favor escolha

Tamanho:

50μL

Trilha, tamanho em massa ou solicitações personalizadas entre em contato conosco

Detalhes do produto

Plano de fundo

As histonas são proteínas nucleares básicas responsáveis pela estrutura do nucleossomo da fibra cromossômica em eucariotos. Essa estrutura consiste em aproximadamente 146 pb de DNA enrolado em um nucleossomo, um octâmero composto por pares de cada uma das quatro histonas centrais (H2A, H2B, H3 e H4). A fibra da cromatina é ainda mais compactada através da interação de uma histona ligante, H1, com o DNA entre os nucleossomos para formar estruturas de cromatina de ordem superior. Este gene não tem íntron e codifica uma histona dependente de replicação que é membro da família das histonas H3. As transcrições deste gene não possuem caudas poliA; em vez disso, eles contêm um elemento de terminação palindrômico. Este gene é encontrado no grande agrupamento de genes de histonas no cromossomo 6p22-p21.3.

Aplicação

Para garantir o desempenho ideal do ensaio, a AREX recomenda a realização de titulação de reagentes adaptada a cada sistema de teste para obter resultados de detecção ideais.

Aplicação	Razão de diluição
WB	1:500 - 1:1000
Chip	6 μg/5×10⁶ células
Cortar e etiquetar	1:100

*Os resultados são específicos da amostra. Consulte as condições de ensaio locais e os parâmetros de teste para referência.

Visão geral

Isótipo	IgG
Purificação	Proteína A
Localização Celular	Núcleo
Formulário/Buffer	PBS, Glicerol, BSA
ID UniProt	P68431
Sinônimos	H3K18la
Conjugado	Não conjugado
Especificidade	Anti-L-Lactyl-Histone H3 (Lys18) Rabbit mAb (ChIP Grade) detecta histona H3 somente quando ela é L-lactilada em Lys18.
ID UniProt	P68431
Imunogênio	Peptídeo de histona H3 humana lactilada (Lys18)
MW (kDa)	15

*AREX otimiza continuamente nossos produtos. O conteúdo da página da Web pode não refletir as atualizações mais recentes. Para dúvidas, entre em contato com info@arexbio.com ou com seu distribuidor local.
*Número do clone, reatividade, origem/host e clonalidade podem ser encontrados no nome do produto e na seção de recursos principais acima.

Dados

Quantidade de peptídeos: 4 ng, 16 ng, 64 ng
Tampão de bloqueio: 5% NFDM/TBST
Diluição de Ab primário: 1:2000
Incubação de Ab primário: 2 horas em temperatura ambiente
Ab secundário: anti-cabra -IgG de coelho H&L pAb (conjugado HRP)
Tempo de exposição: 10 segundos
A lista de peptídeos usados no experimento é fornecida abaixo.
Pista 1: H3K18 L-lactyl. Pista 2: acetil H3K18.
Pista 3: crotonil H3K18. Pista 4: H3K18 butirilo.
Pista 5: propionil H3K18. Pista 6: H3K18 2-hidroxiisobutiril.
Pista 7: H3K18 β-hidroxibutiril. Pista 8: H3K18 não modificado

Lisados: (-) células HeLa; (+) Células HeLa tratadas com lactato de sódio 25 mM por 24 horas
Quantidade de carga de proteína: 20 μg
Tampão de bloqueio: 5% NFDM/TBST
Diluição de Ab primário: 1:1000
Incubação de Ab primário: 2 horas em temperatura ambiente
Ab secundário: anti-cabra -IgG de coelho H&L pAb (conjugado HRP)
Tempo de exposição: 60 segundos
Tamanho de banda previsto: 15 kDa
Tamanho de banda observado: 15 kDa

Lisados: (-) células K562; (+) Células K562 tratadas com lactato de sódio 25 mM por 24 horas
Quantidade de carga de proteína: 20 μg
Tampão de bloqueio: 5% NFDM/TBST
Diluição de Ab primário: 1:1000
Incubação de Ab primário: 2 horas em temperatura ambiente
Ab secundário: anti-cabra -IgG de coelho H&L pAb (HRP Conjugado)
Tempo de exposição: 60 segundos
Tamanho de banda previsto: 15 kDa
Tamanho de banda observado: 15 kDa

Lisados: (-) células NIH/3T3; (+) Células NIH/3T3 tratadas com lactato de sódio 25 mM por 24 horas
Quantidade de carga de proteína: 20 μg
Tampão de bloqueio: 5% NFDM/TBST
Diluição de Ab primário: 1:1000
Incubação de Ab primário: 2 horas em temperatura ambiente
Ab secundário: anti-cabra -IgG de coelho H&L pAb (Conjugado HRP)
Tempo de exposição: 60 segundos
Tamanho de banda previsto: 15 kDa
Tamanho de banda observado: 15 kDa

Amostra: células HeLa tratadas com lactato de sódio 100 mM por 24 horas
Condições de cross-linking: sem cross-linking
Quantidade de cromatina por IP: 5×10⁶ células
Quantidade de Ab por IP: 6 μg
Tipo e quantidade de esferas por IP: 50 μL de Proteína A MagBeads
Descrição: Cromatina imunoprecipitações foram realizadas com 6 μg de IgG de coelho normal como controle negativo. O DNA imunoprecipitado foi quantificado por PCR em tempo real usando primers específicos para as regiões GAPDH-CDS humana, promotor LDHA, LDHA, FOXO3a downstream, RAB20 e TUBBP10. Os dados são apresentados como enriquecimento de cada amostra em relação à quantidade total de entrada em cada amplicon.

Amostra: células HeLa tratadas com lactato de sódio 100 mM por 24 horas
Quantidade de células: 1×10⁵ células
Diluição de Ab primário: 1:100
Incubação de Ab primário: 4⁰C durante a noite
Ab secundário: anti-cabra -IgG de coelho H&L pAb
Ab secundário diluição: 1:1400
Descrição: CUT&Tag foi realizado com mAb de coelho Anti-L-Lactyl-Histone H3 (Lys18) juntamente com IgG de coelho normal como controle negativo. O DNA resultante foi sequenciado na plataforma Illumina NovaSeq com leituras finais emparelhadas de 150 pb e uma profundidade de sequenciamento de 3 milhões de leituras. A figura mostra enriquecimentos significativos de sinal H3K18la nas regiões promotoras de CD9, PLEKHG6, LTBR e GAPDH.

Armazenamento

Enviado a 4 ℃. Armazene a -20°C por um ano. Evite ciclos repetidos de congelamento/descongelamento.

Nota

Somente para uso em pesquisa. Não para uso diagnóstico, terapêutico, profilático ou in vivo.

Perguntas frequentes

Quais são os principais tipos de anticorpos de pesquisa e como eles diferem?

Os anticorpos de pesquisa são divididos principalmente em anticorpos monoclonais e anticorpos policlonais. Os anticorpos monoclonais normalmente oferecem maior especificidade e melhor consistência entre lotes, enquanto os anticorpos policlonais geralmente fornecem uma afinidade mais forte, mas podem mostrar mais variação entre os lotes. A escolha depende de suas necessidades experimentais específicas.

Como posso saber se um anticorpo de pesquisa é adequado para meu experimento?

Recomenda-se revisar cuidadosamente a ficha técnica do produto para aplicações validadas, reatividade de espécies, diluições recomendadas e referências publicadas. Para novos anticorpos, geralmente é útil realizar uma validação em pequena escala com amostras de controle positivo.

O armazenamento inadequado de anticorpos de pesquisa pode afetar os resultados experimentais?

Sim. Os anticorpos são sensíveis à temperatura, ciclos repetidos de congelamento/descongelamento e contaminação. O armazenamento inadequado pode levar à redução da atividade, aumento do fundo ou sinais mais fracos. É melhor seguir as instruções de armazenamento fornecidas na ficha técnica do produto.

Por que a diluição recomendada na folha de dados não funciona bem no meu experimento?

A diluição recomendada é baseada nas condições de teste do fornecedor. Fatores como tipo de amostra, método de fixação e sistema de detecção em seu laboratório podem influenciar a concentração ideal de trabalho. Muitas vezes é necessário realizar uma otimização em série de diluições em seu próprio sistema.

Que precauções devo tomar ao usar pela primeira vez um anticorpo de pesquisa recém-adquirido?

É aconselhável centrifugar brevemente o anticorpo (especialmente os concentrados ou liofilizados) e, em seguida, realizar um experimento piloto em pequena escala usando as condições recomendadas. Registrar o número do lote e a data de uso também é útil para rastreamento futuro.

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