Anticorpo monoclonal de coelho com etiqueta HA (ARB574)

PM previsto: Depende da proteína de fusão com etiqueta HA
Pista 1: lisado de 293 células transfectadas com gene marcado com HA C-terminal (na diluição de 1:2.000).
Pista 2: lisado de 293 células transfectadas com gene marcado com HA N-terminal (na diluição de 1:1.000).
Pista 3: Lisado de células 293 sem qualquer transfecção (na diluição de 1:400).
Pista 1: 1 μg por pista
Pista 2/3: 10 μg por pista
2º Ab:
GAR HRP(H+L) 1:5.000

Histograma de sobreposição mostrando 293 células transfectadas com gene marcado com HA N-terminal (verde) e C-terminal (vermelho) corado com ARB574. As células foram então incubadas no anticorpo (ARB574, diluição 1:2.000) em 1x PBS/BSA a 1% durante 30 min à temperatura ambiente. O anticorpo secundário utilizado foi um Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) na diluição 1:2.000 por 20 min em temperatura ambiente. Amostra não marcada (preta) foi usada como controle.

Histograma de sobreposição mostrando 293 células transfectadas com gene marcado com HA N-terminal (Verde) e C-terminal (Vermelho) corado com ARB574. As células foram então incubadas no anticorpo (ARB574, diluição 1:2.000) em 1x PBS/BSA a 1% durante 30 min à temperatura ambiente. O anticorpo secundário utilizado foi um Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) na diluição 1:2.000 por 20 min em temperatura ambiente. Amostra não marcada (preta) foi usada como controle.

Marcação HA de coloração ARB574 em células 293 transfectadas com gene marcado com HA N-terminal por IF/ICC (imunofluorescência/imunocitoquímica). As células foram fixadas com paraformaldeído, permeabilizadas com Triton X-100 a 0,1% e bloqueadas com soro de cabra a 10% durante meia hora à temperatura ambiente. As amostras foram incubadas com anticorpo primário (1:2.000) a 4°C. Um policlonal IgG de cabra anti-coelho conjugado com Alexa Fluor® 594- foi usado como anticorpo secundário (1:500). DAPI (azul) foi usado como contra-coloração nuclear. Controle: PBS e anticorpo secundário, um Alexa Fluor® 594-conjugado Goat Anti-Rabbit IgG (1:500).

Marcador HA de coloração ARB574 em células 293 transfectadas com gene marcado com HA C-terminal por IF/ICC (imunofluorescência/imunocitoquímica). As células foram fixadas com paraformaldeído, permeabilizadas com Triton X-100 a 0,1% e bloqueadas com soro de cabra a 10% durante meia hora à temperatura ambiente. As amostras foram incubadas com anticorpo primário (1:2.000) a 4°C. Um policlonal IgG de cabra anti-coelho conjugado com Alexa Fluor® 594- foi usado como anticorpo secundário (1:500). DAPI (azul) foi usado como contra-coloração nuclear. Controle: PBS e anticorpo secundário, um Alexa Fluor® 594-conjugado Goat Anti-Rabbit IgG.

A etiqueta HA foi imunoprecipitada a partir de 0,2 mg de lisado de 293 células inteiras transfectadas com gene marcado com HA N-terminal com ARB574 na diluição de 1:10. 2º Ab: GAR HRP para IP 1:500 Pista 1: ARB574 IP em 293 lisado de células inteiras transfectado com gene marcado com HA N-terminal Pista 2: PBS em vez de ARB574 em 293 lisado de células inteiras transfectado com gene marcado com HA N-terminal Pista 3: 293 lisado de células inteiras transfectado com gene marcado com HA N-terminal, 10 μg (entrada) Exposição: 60s

A etiqueta HA foi imunoprecipitada a partir de 0,2 mg de lisado de 293 células inteiras transfectadas com gene marcado com HA C-terminal com ARB574 na diluição de 1:10. 2º Ab: GAR HRP para IP 1:500 Pista 1: ARB574 IP em 293 lisado de células inteiras transfectado com gene marcado com C-terminal HA Pista 2: PBS em vez de ARB574 em 293 lisado de células inteiras transfectado com gene C-terminal marcado com HA Pista 3: 293 lisado de células inteiras transfectado com C-terminal gene marcado com HA, 10 μg (entrada) Exposição: 60s