Anticorpo monoclonal de coelho com etiqueta HA (ARA782)

MW previsto: Depende da proteína de fusão com tag HA
Pista 1: lisado de células 293 transfectadas com gene marcado com HA C-terminal (ARA782 na diluição de 1:2.000).
Pista 2: lisado de células 293 transfectadas com gene marcado com HA N-terminal (ARA782 na diluição de 1:1.000).
Pista 3: lisado de 293 células sem qualquer transfecção (ARA782 na diluição de 1:400).
Pista 1: 1 µg por pista
Pista 2/3: 10 µg por pista
2º AB:
GARHRP(H+L) 1:5.000
Exposição: 20s

Histograma de sobreposição mostrando células 293 transfectadas com gene marcado com HA N-terminal (Verde) e C-terminal (Vermelho) corado com ARA782. As células foram então incubadas no anticorpo (ARA782, diluição 1:2.000) em 1x PBS/1% BSA durante 30 min à temperatura ambiente. O anticorpo secundário utilizado foi um Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor^® 488 (IgG H+L) na diluição 1:2.000 por 20 min em temperatura ambiente. Amostra não marcada (preta) foi usada como controle.

Marcação HA com coloração ARA782 em células 293 transfectadas com gene marcado com HA N-terminal por IF/ICC (imunofluorescência/imunocitoquímica). As células foram fixadas com paraformaldeído, permeabilizadas com Triton X-100 a 0,1% e bloqueadas com soro de cabra a 10% durante meia hora à temperatura ambiente. As amostras foram incubadas com anticorpo primário (1:2.000) a 4°C. Um policlonal IgG de cabra anti-coelho conjugado com Alexa Fluor® 594- foi usado como anticorpo secundário (1:500). DAPI (azul) foi usado como contra-coloração nuclear.

Controle: PBS e anticorpo secundário, An Alexa Fluor^® 594-conjugated Goat Anti-Rabbit IgG (1:500).

Marcação HA com coloração ARA782 em células 293 transfectadas com gene marcado com HA C-terminal por IF/ICC (imunofluorescência/imunocitoquímica). As células foram fixadas com paraformaldeído, permeabilizadas com Triton X-100 a 0,1% e bloqueadas com soro de cabra a 10% durante meia hora à temperatura ambiente. As amostras foram incubadas com anticorpo primário (1:2.000) a 4°C. Um policlonal IgG de cabra anti-coelho conjugado com Alexa Fluor® 594- foi usado como anticorpo secundário (1:500). DAPI (azul) foi usado como contra-coloração nuclear.

Controle: PBS e anticorpo secundário, An Alexa Fluor^® 594-conjugated Goat Anti-Rabbit IgG (1:500).

A etiqueta HA foi imunoprecipitada a partir de 0,2 mg de lisado de 293 células inteiras transfectadas com o gene marcado com HA N-terminal com ARA782 na diluição de 1:10.
2º AB:
GAR HRP para IP 1:500

Pista 1: ARA782 IP em lisado de células inteiras 293 transfectadas com gene marcado com HA N-terminal
Pista 2: PBS em vez de ARA782 em 293 lisado de células inteiras transfectadas com gene marcado com HA N-terminal
Pista 3: 293 lisado de células inteiras transfectadas com gene marcado com HA N-terminal, 10 μg (entrada)

Exposição: anos 60

A etiqueta HA foi imunoprecipitada a partir de 0,2 mg de lisado de 293 células inteiras transfectadas com o gene marcado com HA C-terminal com ARA782 na diluição de 1:10.
2º AB:
GAR HRP para IP 1:500

Pista 1: ARA782 IP em lisado de células inteiras 293 transfectadas com gene marcado com HA C-terminal
Pista 2: PBS em vez de ARA782 em 293 lisado de células inteiras transfectadas com gene marcado com HA terminal C-
Pista 3: lisado de células inteiras 293 transfectadas com gene marcado com HA C-terminal, 10 μg (entrada)

Exposição: anos 60