Kit de Extração e Purificação de Exossomos (Soro-Plasma)

Os exossomos são pequenas vesículas (30-150 nm) contendo RNA e proteínas secretadas pelas células, abundantes no soro/plasma. Considera-se que os exossomos têm a função de mensageiro intercelular, transmitindo seus efetores ou moléculas sinalizadoras entre células específicas.

No estudo biológico funcional do exossomo, é necessário separar suas partículas completas. O Kit de Extração Rápida de Exossomo Soro/Plasma desenvolvido de forma independente pela Umibio é adequado para a extração de exossomo no soro/plasma após a otimização dos componentes. Ajuda a obter alta - pureza partículas exossômicas de forma rápida e eficiente.

Centrífuga de alta velocidade (com velocidade de rotação de até 12.000 rpm), oscilador de vórtice; Tubo centrífugo de 1,5 mL, solução tampão PBS, máquina de gelo.

* Livre de nuclease, estéril

• · Cobre sobrenadante celular, tecido, urina, soro, plasma, leite, etc.
• · Alta capacidade de processamento de amostras, até 5 vezes maior que produtos similares.
• · Os exossomos podem ser usados para co-cultura celular e pesquisa ômica.
• · Dedicado à otimização contínua de kits de exossomos para pesquisa e desenvolvimento.
• · Confiado por mais de 300 clientes, garantindo compra e uso sem preocupações.
• · Custo-efetivo para apoiar pesquisas em larga escala e ao mesmo tempo economizar custos.

I. Pré-tratamento de amostra

1. A centrífuga deve ser pré-resfriada por 10 minutos a 4°C antes do uso;

2. Amostragem: no caso de amostra congelada, descongelar a 2-8°C após retirada da geladeira; no caso de uma amostra fresca, armazene-a a 2-8°C após a coleta.

3. Sub-embalar a amostra de acordo com 500 μL /tubo, e completar a parte insuficiente para 500 μ L com 1 × PBS.

II Remoção de proteínas impuras

1. Depois de retirar Solução A do kit, coloque-o no freezer da geladeira por pelo menos 1 hora. Retire o Solução A pré-resfriada e coloque-a em gelos impetuosos;

2. Adicionando Solução A: adicione 400μL solução pré-resfriada A em 500μL de amostra de sangue e cubra firmemente o tubo centrífugo imediatamente e misture totalmente usando o oscilador de vórtice por 30 segundos;

3. Centrifugação para remover a proteína: centrifugar a amostra uniformemente misturada a 4°C a 12.000 rpm por 20 min para remover a proteína impura da amostra;

4. Transferência do sobrenadante: transferir o sobrenadante centrifugado cujas proteínas impuras foram removidas para um novo tubo centrífugo de 1,5mL;

III Extração de Exossomo

1. Adicionando Solução B: adicione 120μL Solução B no sobrenadante centrifugado cujas proteínas impuras foram removidas;

2. Misturar a solução: após adicionar Solução B, cubra firmemente o tubo centrífugo e misture-o completamente usando o oscilador de vórtice por 2 min. Depois deixe repousar durante 5 min à temperatura ambiente;

3. Precipitação do exossomo: centrifugar o tubo centrífugo com a solução mista a 4°C a 12.000 rpm por 15 min e descartar o sobrenadante;

4. Centrifugar novamente: centrifugar o tubo centrífugo com precipitação a 4°C a 12.000 rpm por 2 min e descartar o sobrenadante (nota: o sobrenadante deve ser sugado tanto quanto possível). Deixe o tubo centrífugo de 1,5 mL aberto em temperatura ambiente para 10 minutos;

5. Ressuspender o exossomo: pegue 200μL de 1×PBS e gire o precipitado centrifugado uniformemente. Depois de dissolvido, transfira a solução ressuspensa para um novo tubo centrífugo de 1,5 mL;

6. Obtenção de partículas exossômicas: centrifugar tubo centrífugo de 1,5 mL com solução ressuspensa a 4°C a 12.000 rpm por 2 min e manter o sobrenadante. Este sobrenadante é rico em partículas exossômicas.

(Nota: neste ponto pode haver uma grande quantidade de precipitados, o que é um fenômeno normal)

IV Purificação de Exossomo

1. Purificação do exossomo: transfira o produto bruto obtido de partículas exossômicas para a câmara superior do Filtro de Purificação de Exossomo (Coluna EPF) e centrifugar a 4°C a 5600 rpm por 20 min. Após a centrifugação, colete o fluido na parte inferior da coluna EPF. Este fluido são as partículas exossômicas purificadas; (Observação: as colunas EPF não são reutilizáveis)

2. Armazenamento do exossomo: os exossomos purificados devem ser subembalados a 50-100μL e armazenados em geladeira de baixa temperatura a -80℃ para posterior uso experimental.

V Condições de armazenamento

Após receber o produto, armazene os reagentes separadamente. Por favor, misture bem antes de usar.

Solução A: transportar em temperatura ambiente e armazenar a -18°C após a abertura do kit (camada de freezer de uma geladeira convencional);

Solução B: armazenar em temperatura ambiente;

Coluna EPF: armazenar em temperatura ambiente;

Precauções

Este produto é apenas para pesquisas em ciências biológicas!

VI Outros Itens

Para perguntas mais técnicas, entre em contato com a Umibio para obter mais respostas.