Zestaw ekstrakcji egzosomu (mleko)

Egzosomy to małe pęcherzyki (30 - 150 nm) zawierające RNA i białko wydzielane przez komórki, które są obfite w płynach ustrojowych, takich jak krew, ślina, mocz i mleko. Uważa się, że egzosom ma funkcję przekaźnika między komórkowego, przenosząc ich efektory lub cząsteczki sygnału między specyficzne komórki. Jednak jego struktura, skład efektorów i związany z tym szlak biologiczny pozostają obecnie niejasne.

W biologicznym badaniu funkcjonalnym egzosomu konieczne jest oddzielenie jego kompletnych cząstek, ale konwencjonalna metoda ultradtrotrifugacji ma skomplikowane etapy, wysokie wymagania dotyczące sprzętu i charakteru trudnego działania. Zestaw szybkiego ekstrakcji egzosomu niezależnie rozwinięty przez Umibiois odpowiedni do ekstrakcji egzosomu w emulsji po optymalizacji składników, które mogą szybko i skutecznie uzyskać cząstki egzosomalne o wysokiej czystości. Można go zastosować do analizy mikroskopii elektronowej, analizy wielkości cząstek NTA, analizy kwasu nukleinowego, analizy białka, eksperymentów cytologicznych, eksperymentów na zwierzętach itp.

Wirówka o dużej prędkości (do 10000 g siła odśrodkowa), oscylator wirowy; 50 ml wirnik odśrodkowy, 50 ml rurka odśrodkowa, 2 ml wirnik odśrodkowy, 1,5 ml rurki odśrodkowej, roztwór buforowy PBS.

* Nuclease - bezpłatny, sterylny

• · Obejmuje supernatant komórek, tkankę, mocz, surowicę, plazmę, mleko itp.
• · Wysoka zdolność przetwarzania próbek, do 5 razy większa niż podobnych produktów.
• · Egzosomy mogą być używane do badań CEL CO - CULTY I OMICS.
• · Dedykowany do ciągłej optymalizacji zestawów egzosomów do badań i rozwoju.
• · Zaufane przez ponad 300 klientów, zapewniając zmartwienie - Bezpłatne zakupy i korzystanie.
• · Koszt - Skuteczne wspieranie badań w skali podczas oszczędzania kosztów.

I. Przykładowa wstępna obróbka

1. Próbkowanie: W przypadku zamrożonej próbki wyjmij ją z lodówki i rozmrozić w łaźni wodnej o 25 ° C i umieść w pełni - rozmrożoną próbkę na lodzie; W przypadku świeżej próbki zbierz próbkę i umieść ją na lodzie.

2. Początkowa dawka próbki: (dawka próbki dla pojedynczej ekstrakcji)

3. Odwirowanie w celu usunięcia lipidów: Przenieś próbkę do rurki odśrodkowej i wirowanie przy 4 ℃ przy 10000 g przez 20 minut w celu usunięcia lipidów i niektórych białek z próbki;(Uwaga: próbka jest podzielona na trzy warstwy po odwirowaniu, przy czym górna warstwa to warstwa lipidowa, dolna warstwa jest osadem białka, a warstwa środkowa jest serwatką). Po odwirowaniu stan górnej warstwy jest „kompaktowy, stabilny i nie łatwy do spada”. Jeśli górna warstwa jest „puszysta i łatwa do spada”, a w dolnej warstwie jest wiele osadów, ten krok można powtarzać w sposób ciągły, a po każdej wirowaniu należy powtarzać ciecz warstwy środkowej).

4. Przeniesienie serwatki: Przenieś serwatkę (ciecz środkowej warstwy), której lipidy zostały usunięte do nowej 50 ml rurki odśrodkowej;(Uwaga: Górną warstwę lipidów można przebić za pomocą hebrhead i powoli zrzucana lub przeniesiona z pipetą. Jest to normalne zjawisko, że istnieje niewielka ilość lipidów i osadów w przeniesionej serwce, co nie wpłynie na następny eksperyment.)

II Nieczyste usuwanie białka

1. Ustalanie serwatki: Dodaj Rozwiązanie a do serwatki. Odwróć rurkę odśrodkową, aby dokładnie ją wymieszać, aż będzie „półprzezroczysta”. Następnie dodaj Rozwiązanie b i odwróć rurkę, aby dokładnie wymieszać. Niech stanie na 2 ℃ do8 ℃ przez 10 minut; (Uwaga: Po zakończeniu statycznego umieszczenia delikatnie potrząśnij rurką odśrodkową. „Pudding tofu - jak” zostanie przedstawiony stał, a płyn będzie „przezroczysty”. Jeśli stan „puddingu tofu” nie jest przedstawiony lub próbka jest nadal „mleczna biała”, można dodać odpowiednią ilość roztworu B, dopóki płyn nie zmieni „przezroczysty”.)

UWAGA: Prosimy o konwertowane dawki, które mają być dodane zgodnie z proporcją powyższej tabeli.

2. Odwirowanie w celu usunięcia białka: wirowanie ustalonej serwatki przy 4 ℃ przy 10000 g przez 10 minut i zebranie supernatantu;

3. Filtrowanie supernatantu: przenieś zebrany supernatant do kolumny wirowania i filtracji 50 ml oraz wirowania przy 4 ℃ przez 2 minuty przy 3000 g; (Uwaga: Jeśli supernatant nie jest w pełni filtrowany, ten krok można powtórzyć. 50 ml wirowania i kolumna filtracyjna jest materiałem jednorazowym i nie zaleca się powtarzającego się zastosowania.)

4. Przenieś filtrowany supernatant do nowej rurki odśrodkowej, dodaj Rozwiązanie c i odwróć go, aby dokładnie go wymieszać; (Uwaga: dawka roztworu C powinna być spójna z dawką roztworu B)

III Ekstrakcja egzosomu

1. Wstępne obróbka supernatantu: Dodaj Rozwiązanie d do dodanego supernatantu Rozwiązanie c, a konkretne dawki są następujące:

UWAGA: Prosimy o konwertowanie innych dawek zgodnie z równą proporcją dawkowania odczynnika w tabeli

2. Mieszanie rozwiązania: Po dodaniu Rozwiązanie d, Zakryj szczelnie rurkę odśrodkową i wymieszaj ją równomiernie za pomocą oscylatora wiru przez 1 min. Następnie pozwól mu od 2 ℃ do 8 ℃ przez co najmniej 2 godziny; (Uwaga: Dodanie czasu stojącego może zwiększyć stopę osiągnięcia egzosomu, ale czas stania nie może przekraczać 24 godzin)

3. Exosom wytrącający się: Wyjmij rurkę odśrodkową z mieszanym alkoholem i pozwól jej wirować przy 4 ℃ przy 10000 g Przez 60 minut odrzuć supernatant, a opady są bogate w cząstki egzosomalne;(Uwaga: supernatant powinien być zasysany tak bardzo, jak to możliwe)

4. Ponowne zawieszanie egzosomu: weź 1 × PBS, zakręć wytrącenie wirowania (patrz następujący tabela dla dawki określonej). Po rozpuszczeniu przenieś ponowne roztwór do nowej 1,5 ml rurki odśrodkowej;

UWAGA: Prosimy o konwertowanie innych dawek zgodnie z równą proporcją dawkowania odczynnika w tabeli

5. Uzyskanie cząstek egzosomalnych: wirowanie 1,5 ml rurki odśrodkowej z ponownie zawieszonym roztworem przy 4 ℃ przy 12000 g przez 5 minut i zachowaj supernatant. Ten supernatant jest bogaty w cząstki egzosomalne. (Uwaga: W przypadku dużej ilości osadów ten krok można powtórzyć wiele razy, aż nie nastąpi oczywiste opady. Zbierz supernatant po każdej wirowaniu. Roztwór egzosomu może mieć lekki mleczny biały kolor, co jest normalne)

6. Przechowywanie egzosomu: Oczyszczone egzosomy powinny być pod - pakowane na 50 - 100 μl i przechowywane w lodówce o niskiej -

IV Warunki przechowywania

Ten produkt można stabilnie przechowywać w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Proszę dokładnie wymieszać przed użyciem.

V Środki ostrożności

Ten produkt jest przeznaczony wyłącznie na badania naukowe, a diagnoza medyczna lub inne cele są zabronione!