Kit di estrazione e purificazione dell'esosoma (siero - Plasma)

Gli esosomi sono piccole vescicole (30 - 150 nm) contenenti RNA e proteine ​​secrete dalle cellule, che sono abbondanti nel siero/plasma. Si ritiene che gli esosomi abbiano la funzione del messaggero interiotico, trasmettendo i loro effettori o molecole di segnale tra cellule specifiche.

Nello studio funzionale biologico dell'esosoma, è necessario separare le sue particelle complete. Il kit di estrazione rapida dell'esosoma sierico/plasmatico sviluppato indipendentemente da Umibiois adatto all'estrazione di esosoma nel siero/plasma dopo l'ottimizzazione dei componenti. Aiuta a ottenere Alta - Purività particelle esosomiali rapidamente ed efficiente.

Centrifuga ad alta velocità (con velocità di rotazione fino a 12000 giri / min), oscillatore di vortice; 1,5 ml di tubo centrifugo, soluzione tampone PBS, macchina per il ghiaccio.

* Nucleasi - libero, sterile

• · Copre il surnatante cellulare, il tessuto, l'urina, il siero, il plasma, il latte, ecc.
• · Elevata capacità di elaborazione del campione, fino a 5 volte quella di prodotti simili.
• · Gli esosomi possono essere utilizzati per la ricerca cellulare di coltura e omiche.
• · Dedicata all'ottimizzazione continua dei kit di esosomi per la ricerca e lo sviluppo.
• · Affidati di oltre 300 clienti, garantendo preoccupazione - acquisti e utilizzo gratuiti.
• · Costo - efficace per supportare la ricerca di grandi dimensioni - risparmiando i costi.

I. Pretrattamento del campione

1. La centrifuga deve essere pre - raffreddata per 10 minuti a 4 ℃ prima dell'uso;

2. Campionamento: in caso di campione congelato, scongelarlo a 2 - 8 ℃ dopo aver portato fuori dal frigorifero; In caso di un campione nuovo, conservalo a 2 - 8 ℃ dopo aver raccolto.

3. Sub - confezionano il campione in base a 500 μL /tubo e costituiscono la parte insufficiente a 500 μ L con 1 × PBS.

II impura rimozione delle proteine

1. Dopo aver tirato fuori Soluzione A. Dal kit, posizionalo nello strato del congelatore del frigorifero per almeno 1 ora. Elimina il Pre;

2. Aggiunta Soluzione A.: Aggiungi 400μL Pre - Soluzione raffreddata a in 500 μl di campione di sangue e coprite immediatamente il tubo centrifugo e mescolalo completamente usando l'oscillatore di vortice per 30 secondi;

3. Centrifugazione per rimuovere la proteina: centrifuga il campione uniformemente miscelato a 4 ℃ a 12000 giri / min per 20 minuti per rimuovere la proteina impura nel campione;

4. Trasferimento del surnatante: trasferire il surnatante centrifugato le cui proteine ​​impure sono state rimosse in un nuovo tubo centrifugo da 1,5 ml;

III estrazione esosoma

1. Aggiunta Soluzione b: Aggiungi 120μl Soluzione b Nel surnatante centrifugato le cui proteine ​​impure sono state rimosse;

2. Mescolando la soluzione: dopo l'aggiunta Soluzione b, coprire strettamente il tubo centrifugo e mescolarlo completamente usando l'oscillatore di vortice per 2 minuti. Quindi lascialo stare per 5 minuti a temperatura ambiente;

3. Precipitando l'esosoma: centrifuga il tubo centrifugo con la soluzione mista a 4 ℃ a 12000 giri / min per 15 minuti e scartare il surnatante;

4. Centrifuging di nuovo: centrifuga il tubo centrifugo con precipitazioni a 4 ℃ a 12000 giri / min per 2 minuti e scartare il surnatante (Nota: il surnatante deve essere risucchiato il più possibile). Lascia aperta il tubo centrifugo da 1,5 ml a temperatura ambiente per 10 min;

5. Resuspendere l'esosoma: prendere 200 μl di 1 × PBS e girare uniformemente il precipitato centrifugato. Dopo che è stato sciolto, trasferire la soluzione risospesa in una nuova provetta centrifuga da 1,5 ml;

6. Ottenimento di particelle esosomiali: centrifuga da 1,5 ml di tubo centrifugo con soluzione risospesa a 4 ℃ a 12000 giri / min per 2 minuti e mantenere il surnatante. Questo surnatante è ricco di particelle esosomiali.

(Nota: a questo punto, potrebbe esserci una grande quantità di precipitati, che è un fenomeno normale)

IV Purificazione esosoma

1. Purifica dell'esosoma: trasferire il prodotto grezzo ottenuto di particelle esosomiali nella camera superiore del filtro di purificazione dell'esosoma (Colonna EPF) e centrifuga a 4 ℃ a 5600 giri / min per 20 minuti. Dopo la centrifugazione, raccogli il fluido nella parte inferiore della colonna EPF. Questo fluido è le particelle esosomiali purificate; (Nota: le colonne EPF non sono riutilizzabili)

2. Memorizzazione dell'esosoma: gli esosomi purificati devono essere sub - confezionati a 50 - 100 μl e conservati in un frigorifero a bassa temperatura a - 80 ℃ per il successivo uso sperimentale.

Condizioni di archiviazione V.

Dopo aver ricevuto il prodotto, conservare separatamente i reagenti. Si prega di mescolarlo accuratamente prima dell'uso.

Soluzione A: trasporto a temperatura ambiente e memorizzare a - 18 ℃ dopo l'apertura del kit (lo strato di congelatore di un frigorifero convenzionale);

Soluzione B: conservare a temperatura ambiente;

Colonna EPF: conservare a temperatura ambiente;

V Precauzioni

Questo prodotto è solo per la ricerca di scienze della vita!

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