Kit ELISA CCL5/RANTES Manusia

RANTES (Diatur Saat Aktivasi, Sel T Normal Diekspresikan dan Mungkin Disekresikan), juga dikenal sebagai CCL5, adalah anggota subfamili kemokin "CC". Ia memainkan peran utama dalam respon imun inflamasi melalui kemampuannya untuk menarik leukosit secara kemo dan memodulasi fungsinya. CDNA untuk RANTES awalnya ditemukan melalui hibridisasi subtraktif sebagai rangkaian spesifik sel T. CDNA RANTES manusia mengkodekan polipeptida prekursor residu asam amino (aa) 91 yang sangat basa dengan peptida sinyal hidrofobik 23 aa yang dibelah untuk menghasilkan protein matang 68 aa. RANTES manusia menunjukkan sekitar 85% homologi dengan RANTES tikus pada tingkat aa yang disimpulkan.
RANTES adalah kemoatraktan ampuh untuk sejumlah jenis sel berbeda termasuk sel T memori CD4+/CD45RO+ yang tidak terstimulasi dan sel T CD4+ dan CD8+ terstimulasi dengan fenotipe naif dan memori, sel NK, basofil, eosinofil, sel dendritik, sel mast, monosit, dan mikroglia. Selain efeknya terhadap migrasi, RANTES dapat mengaktifkan sejumlah tipe sel termasuk sel T, monosit, neutrofil, sel NK, sel dendritik, dan astrosit. Aktivasi sel T umumnya memerlukan konsentrasi RANTES yang relatif tinggi (~ 1 μM) dan bergantung pada agregasi molekul dan hubungannya dengan glikosaminoglikan permukaan sel (GAGs). Apakah ini [ada beberapa kata yang hilang, mungkin 'aktivitas terjadi secara in vivo'] masih belum jelas meskipun pada tikus, mutan RANTES yang disuntikkan secara intraperitoneal yang tidak mampu mengagregasi dan/atau mengikat GAG, tidak mampu menarik leukosit jika dibandingkan dengan kontrol tipe liar. Penelitian in vivo lainnya menunjukkan bahwa tikus knockout RANTES menunjukkan kurangnya perekrutan leukosit ke tempat peradangan akut. - RANTES, diketahui berinteraksi dengan empat reseptor berpasangan protein G-transmembran yang teridentifikasi: CCR1, CCR3, CCR4, dan CCR5 (22-25). Stimulasi RANTES dapat memulai berbagai rangkaian sinyal yang bergantung pada konteks sel. Misalnya, pada sel T-, RANTES dapat menstimulasi peningkatan Ca2+ intraseluler, dan aktivasi jalur pensinyalan fokal adhesi kinase (FAK), protein kinase A, PI3-kinase, Rho GTPase, dan JAK/STAT. Protein sitomegalovirus US28 menunjukkan homologi yang signifikan dengan reseptor kemokin CC dan mampu mengikat RANTES. Membran-yang mencakup US28, bergantung pada konteksnya, dapat memberi sinyal secara konstitutif, mengikat RANTES dan memulai kaskade sinyal yang dimediasi G-protein-, atau menyita RANTES dan berpotensi mengubah respons peradangan.
Reseptor RANTES CCR5 juga merupakan ko-reseptor utama untuk varian R5 (M-tropik) dari HIV-1. Telah dibuktikan bahwa RANTES, serta ligan CCR5 lainnya, protein inflamasi makrofag (MIP)-1 alfa dan MIP-1 beta, dapat secara kompetitif menghambat interaksi CCR5/HIV-1 dan menekan infeksi virus secara in vitro. Efek ini tampaknya tidak memerlukan sinyal utuh dari reseptor CCR5. Akibatnya, bentuk modifikasi dari RANTES dan senyawa non-peptida yang menghalangi interaksi HIV-1 dengan CCR5 menunjukkan harapan untuk terapi di masa depan. Sebaliknya, beberapa laporan menunjukkan bahwa RANTES dapat meningkatkan replikasi in vitro varian X4 (T-tropic) dari HIV-1 yang menggunakan CXCR4 sebagai ko-reseptor dan bukan CCR5. Aktivitas ini biasanya memerlukan konsentrasi RANTES yang relatif tinggi (~μM) dan bergantung pada interaksi dengan GAG permukaan sel, oligomerisasi, dan aktivasi kaskade pensinyalan tirosin kinase dan MAP kinase.

hal/ml	OD.		Rata-rata	Dikoreksi
0.00	0.0151	0.0162	0.0157
13.72	0.0271	0.0288	0.0280	0.0123
41.15	0.0489	0.0496	0.0493	0.0336
123.46	0.1175	0.1189	0.1182	0.1025
370.37	0.3486	0.3520	0.3503	0.3346
1111.11	1.0108	0.9250	0.9679	0.9522
3333.33	1.8759	2.0533	1.9646	1.9489
10000.00	3.2985	3.1585	3.2285	3.2128

	Presisi Intra - pengujian			Presisi Antar-pengujian
Nomor Sampel	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Rata-rata (pg/ml)	426.6	1631.6	3396	702.2	3412	8842.1
Deviasi Standar	37.6	128.2	288.6	44.6	194.4	506.5
Koefisien Variasi (%)	8.8	7.9	8.5	6.4	5.7	5.7

Presisi Intra-assay (Presisi dalam suatu pengujian) Tiga sampel dengan konsentrasi yang diketahui diuji dua puluh kali pada satu pelat untuk menilai presisi intra-assay.

Presisi Antar-pengujian (Presisi antar pengujian) Tiga sampel dengan konsentrasi yang diketahui diuji enam kali pada satu pelat untuk menilai presisi intra-pengujian.

Pemulihan lonjakan dievaluasi dengan memasukkan 3 level CCL5 manusia ke dalam sampel serum manusia yang sehat. Serum yang tidak diberi duri digunakan sebagai blanko dalam percobaan ini.
Pemulihan berkisar antara 90% hingga 106% dengan rata-rata pemulihan keseluruhan sebesar 97%.

Contoh Matriks	Sampel Dievaluasi	Kisaran (hal/ml)	Terdeteksi (%)	Rata-rata Terdeteksi (pg/ml)
serum	30	943.0-38560.8	100	21207.7

Serum/Plasma – Tiga puluh sampel dari sukarelawan yang tampak sehat dievaluasi keberadaan CCL5 dalam pengujian ini. Tidak ada riwayat medis yang tersedia untuk para donor.