PERK Kaninchen Polyklonaler Antikörper

Western-Blot-Analyse der PERK-Expression in A549- (A) und HepG2-Ganzzelllysaten (B). (Vorhergesagte Bandengröße: 125 kD; beobachtete Bandengröße: 125 kD)

Immunhistochemische Analyse der PERK-Färbung in einem mit Formalin fixierten, in Paraffin eingebetteten Gewebeschnitt des menschlichen Gehirns. Der Schnitt wurde mittels wärmevermittelter Antigengewinnung mit Natriumcitratpuffer (pH 6,0) vorbehandelt. Anschließend wurde der Schnitt mit dem Antikörper bei Raumtemperatur inkubiert und mithilfe eines HRP-konjugierten Kompaktpolymersystems nachgewiesen. Als Chromogen wurde DAB verwendet. Anschließend wurde der Schnitt mit Hämatoxylin gegengefärbt und mit DPX fixiert.

Immunfluoreszenzanalyse der PERK-Färbung in HeLa-Zellen. Formalinfixierte Zellen wurden mit 0,1 % Triton X-100 in TBS für 5-10 Minuten permeabilisiert und mit 3 % BSA-PBS für 30 Minuten bei Raumtemperatur blockiert. Die Zellen wurden mit dem Primärantikörper in 3 % BSA-PBS sondiert und über Nacht bei 4 °C in einer befeuchteten Kammer inkubiert. Die Zellen wurden mit PBST gewaschen und mit einem DyLight 594-konjugierten Sekundärantikörper (rot) in PBS bei Raumtemperatur im Dunkeln inkubiert. Zur Färbung der Zellkerne (blau) wurde DAPI verwendet.

Immunpräzipitation von PERK aus 0,5 mg Hela-Ganzzellextrakt-Lysat unter Verwendung von 5 µg Anti-PERK-Antikörper und 50 µl Protein-G-Magnetkügelchen (+). Der Kontrolle (-) wurde kein Antikörper zugesetzt. Der Antikörper wurde unter Rühren mit Protein-G-Kügelchen 10 Minuten lang inkubiert, in RIPA-Puffer verdünntes Hela-Ganzzellextrakt-Lysat wurde zu jeder Probe gegeben und weitere 10 Minuten unter Rühren inkubiert. Die Proteine ​​wurden durch Zugabe von 40 μl SDS-Ladepuffer eluiert und 10 Minuten lang bei 70 °C inkubiert. 10 µl jeder Probe wurden auf einem SDS-PAGE-Gel aufgetrennt, auf eine Nitrozellulosemembran übertragen, mit 5 % BSA blockiert und mit Anti-PERK Antibody sondiert.