NF-kappaB p65 (Phospho-T254) Polyklonaler Kaninchen-Antikörper

Sicherheitsdatenblatt

NF-kappaB p65 (Phospho-T254) Rabbit Polyclonal Antibody

Hauptmerkmale und Details

Polyklonaler Kaninchen-Antikörper gegen NF-kappaB p65 (Phospho-T254)

Ziel: NF-kappaB p65 (Phospho-T254)
Quelle/Host: Kaninchen
Reaktivität: Mensch, Maus, Ratte, Rind, Affe, Schwein
Klonalität: Polyklonal
Anwendungen: WB, IHC, IF/ICC, IP
Konjugation: Unkonjugiert
Lagerung: bei -20°C

Marke:

KAT.-NR. : APA09489

US$ Bitte wählen

Größe:

50μL 100 μL

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Produktdetails

Hintergrund

NF-kappa-B ist ein pleiotroper Transkriptionsfaktor, der in fast allen Zelltypen vorkommt und der Endpunkt einer Reihe von Signaltransduktionsereignissen ist, die durch eine Vielzahl von Reizen im Zusammenhang mit vielen biologischen Prozessen wie Entzündung, Immunität, Differenzierung, Zellwachstum, Tumorentstehung und Apoptose ausgelöst werden. NF-kappa-B ist ein Homo- oder heterodimerer Komplex, der von der Rel-like-Domäne gebildet wird, die die Proteine RELA/p65, RELB, NFKB1/p105, NFKB1/p50, REL und NFKB2/p52 enthält. Der heterodimere RELA-NFKB1-Komplex scheint am häufigsten vorzukommen. Die Dimere binden an kappa-B-Stellen in der DNA ihrer Zielgene und die einzelnen Dimere haben unterschiedliche Präferenzen für verschiedene kappa-B-Stellen, an die sie mit unterscheidbarer Affinität und Spezifität binden können.

Bewerbung

Um eine optimale Testleistung sicherzustellen, empfiehlt AREX die Durchführung einer auf jedes Testsystem zugeschnittenen Reagenzientitration, um optimale Nachweisergebnisse zu erzielen.

WB	1:500 - 1:1000
IHC	1:100 - 1:200
IF/ICC	1:50 - 1:200
IP	1:10 - 1:100

*Ergebnisse sind probenspezifisch. Bitte beziehen Sie sich als Referenz auf Ihre lokalen Testbedingungen und Testparameter.

Übersicht

Beschreibung	Polyklonaler Kaninchen-Antikörper gegen NF-kappaB p65 (Phospho-T254)
Spezifität	Erkennt endogene Mengen des NF-kappaB p65-Proteins nur, wenn es bei T254 phosphoryliert ist.
Antikörpertyp	Primärer Antikörper
Immunogen	KLH-konjugiertes synthetisches Phosphopeptid, das den Resten entspricht, die T254 des menschlichen NF-kappaB p65-Proteins umgeben. Die genaue Reihenfolge ist urheberrechtlich geschützt.
Reinigung	Der Antikörper wurde durch Immunogenaffinitätschromatographie gereinigt.
Molekulargewicht	Voraussichtlich: 60 kD; Beobachtet: 65 kD
Form/Puffer	Flüssigkeit aus 0,42 % Kaliumphosphat, 0,87 % Natriumchlorid, pH 7,3, 30 % Glycerin und 0,01 % Natriumazid.
Alternative Namen	NFKB3; Transkriptionsfaktor p65; Kernfaktor NF-kappa-B p65-Untereinheit; Kernfaktor des Kappa-Light-Polypeptid-Gen-Enhancers in B-cells 3
Gensymbol	RELA
Entrez Gene	5970 (Mensch); 19697(Maus)
SwissProt	Q04206 (Mensch); Q04207(Maus)

*AREX optimiert unsere Produkte kontinuierlich. Der Inhalt der Webseite spiegelt möglicherweise nicht die neuesten Aktualisierungen wider. Für Anfragen wenden Sie sich bitte an info@arexbio.com oder Ihren lokalen Händler.
*Klonnummer, Reaktivität, Quelle/Host und Klonalität finden Sie oben im Abschnitt Produktname und Hauptfunktionen.

Daten

Western-Blot-Analyse der NF-kappaB p65 (Phospho-T254)-Expression in MCF7-LPS-30mins (A), MCF7-LPS-15mins (B), MCF7-LPS-5mins (C), MCF7 (D), Hela-TNFa-15mins (E), Hela-TNFa-5mins (F), Hela (G) Ganzzelllysaten. (Vorhergesagte Bandengröße: 60 kD; beobachtete Bandengröße: 65 kD)

Immunhistochemische Analyse der NF-kappaB p65 (Phospho-T254)-Färbung in formalinfixierten, in Paraffin eingebetteten Gewebeschnitten von menschlichem Brustkrebs. Der Schnitt wurde mittels wärmevermittelter Antigengewinnung mit Natriumcitratpuffer (pH 6,0) vorbehandelt. Anschließend wurde der Schnitt mit dem Antikörper bei Raumtemperatur inkubiert und mithilfe eines HRP-konjugierten Kompaktpolymersystems nachgewiesen. Als Chromogen wurde DAB verwendet. Anschließend wurde der Schnitt mit Hämatoxylin gegengefärbt und mit DPX fixiert.

Immunfluoreszenzanalyse der NF-kappaB p65 (Phospho-T254)-Färbung in BV2-Zellen. Formalinfixierte Zellen wurden mit 0,1 % Triton X-100 in TBS für 5-10 Minuten permeabilisiert und mit 3 % BSA-PBS für 30 Minuten bei Raumtemperatur blockiert. Die Zellen wurden mit dem primären Antikörper in 3 % BSA-PBS sondiert und über Nacht bei 4 °C in einer versteckten Kammer inkubiert. Die Zellen wurden mit PBST gewaschen und mit einem AREX® Fluor 488 -konjugierten Sekundärantikörper (grün) in PBS bei Raumtemperatur im Dunkeln inkubiert. Phalloidin - AREX® Fluor 594 wurde zum Färben von Aktinfilamenten (rot) verwendet. Zur Färbung der Zellkerne (blau) wurde DAPI verwendet.

Direkte ELISA-Antikörperdosis-/Wirkungskurve unter Verwendung des Anti-NF-kappaB p65 (Phospho-T254)-Antikörpers. Die Konzentration des Antigens (Phosphopeptid und Nicht-Phosphopeptid) beträgt 5 ug/ml. Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG (H&L) - HRP wurde als sekundärer Antikörper verwendet und das Signal wurde durch das TMB-Substrat entwickelt.

Lagerung

Kurzfristig bei 4°C lagern. Bei längerer Lagerung bei -20 °C lagern und Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.

Hinweis

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren geeignet.

FAQs

Was sind die wichtigsten Arten von Forschungsantikörpern und wie unterscheiden sie sich?

Forschungsantikörper werden hauptsächlich in monoklonale Antikörper und polyklonale Antikörper unterteilt. Monoklonale Antikörper bieten in der Regel eine höhere Spezifität und eine bessere Chargenkonsistenz, während polyklonale Antikörper oft eine stärkere Affinität bieten, aber möglicherweise größere Unterschiede zwischen den Chargen aufweisen. Die Wahl hängt von Ihren spezifischen experimentellen Anforderungen ab.

Wie kann ich feststellen, ob ein Forschungsantikörper für mein Experiment geeignet ist?

Es wird empfohlen, das Produktdatenblatt sorgfältig auf validierte Anwendungen, Speziesreaktivität, empfohlene Verdünnungen und veröffentlichte Referenzen zu prüfen. Bei neuen Antikörpern ist in der Regel die Durchführung einer Validierung im kleinen Maßstab mit positiven Kontrollproben hilfreich.

Kann eine unsachgemäße Lagerung von Forschungsantikörpern die Versuchsergebnisse beeinflussen?

Ja. Antikörper reagieren empfindlich auf Temperatur, wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen und Kontamination. Eine unsachgemäße Lagerung kann zu verminderter Aktivität, erhöhtem Hintergrund oder schwächeren Signalen führen. Befolgen Sie am besten die Lagerungshinweise im Produktdatenblatt.

Warum funktioniert die im Datenblatt empfohlene Verdünnung in meinem Experiment nicht?

Die empfohlene Verdünnung richtet sich nach den Testbedingungen des Lieferanten. Faktoren wie Probentyp, Fixierungsmethode und Nachweissystem in Ihrem Labor können die optimale Arbeitskonzentration beeinflussen. Oft ist es notwendig, eine Verdünnungsreihenoptimierung im eigenen System durchzuführen.

Welche Vorsichtsmaßnahmen sollte ich treffen, wenn ich einen neu erworbenen Forschungsantikörper zum ersten Mal verwende?

Es empfiehlt sich, den Antikörper (insbesondere konzentrierte oder lyophilisierte) kurz zu zentrifugieren und anschließend einen kleinen Pilotversuch unter den empfohlenen Bedingungen durchzuführen. Auch die Aufzeichnung der Chargennummer und des Verwendungsdatums ist für die zukünftige Nachverfolgung hilfreich.

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