Maus-IL-1β ELISA-Kit
Hauptmerkmale und Details
- Spezifikation:
- Empfindlichkeit:
- Standardkurvenbereich:
- Standardkurvensteigung:
- Anzahl der Inkubationen:
- Probenvolumen:
- Testtyp:
- Betriebsdauer:
-
Marke:
KAT.-NR. : AEM0029
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Produktdetails
Hintergrund
Die Proteinfamilie Interleukin 1 (IL-1) besteht aus IL-1 alpha, IL-1 beta und dem IL-1-Rezeptorantagonisten (IL-1ra). IL-1 alpha und IL-1 beta binden an dieselben Zelloberflächenrezeptoren und teilen biologische Funktionen. IL-1 wird nicht von unstimulierten Zellen gesunder Personen produziert, mit Ausnahme von Hautkeratinozyten, einigen Epithelzellen und bestimmten Zellen des Zentralnervensystems. Als Reaktion auf Entzündungserreger, Infektionen oder mikrobielle Endotoxine ist jedoch ein dramatischer Anstieg der Produktion von IL-1 durch Makrophagen und verschiedene andere Zelltypen zu beobachten. IL-1 Beta spielt eine zentrale Rolle bei Immun- und Entzündungsreaktionen, Knochenumbau, Fieber, Kohlenhydratstoffwechsel und der GH/IGF-I-Physiologie. Eine unangemessene oder verlängerte Produktion von IL-1 wurde mit einer Vielzahl pathologischer Zustände in Verbindung gebracht, darunter Sepsis, rheumatoide Arthritis, entzündliche Darmerkrankungen, akute und chronische myeloische Leukämie, insulinabhängiger Diabetes mellitus, Arteriosklerose, neuronale Schädigung und altersbedingte Krankheiten.
IL-1 alpha und IL-1 beta sind strukturell verwandte Polypeptide, die etwa 25 % Homologie auf Aminosäureebene (aa) aufweisen. Beide werden als 31-kDa-Vorläufer synthetisiert, die anschließend in reife Proteine von etwa 17,5 kDa gespalten werden. Die Spaltung des IL-1-Beta-Vorläufers durch Caspase-1/ICE ist ein wichtiger Schritt in der Entzündungsreaktion. Weder IL-1 alpha noch IL-1 beta enthalten ein typisches hydrophobes Signalpeptid, es gibt jedoch Hinweise darauf, dass diese Faktoren über nicht klassische Wege sezerniert werden können. Ein Teil des unverarbeiteten IL-1-alpha kann auf der Zellmembran präsentiert werden und behält möglicherweise seine biologische Aktivität. Die Vorläuferform von IL-1 Beta zeigt im Gegensatz zur IL-1 Alpha-Vorläuferform im Vergleich zur verarbeiteten Form nur geringe oder keine biologische Aktivität. Sowohl unverarbeitete als auch reife Formen von IL-1 Beta werden aus der Zelle exportiert.
IL-1 alpha und IL-1 beta üben ihre Wirkung über Rezeptoren der Immunglobulin-Superfamilie aus, die zusätzlich IL-1ra binden. Der 80-kDa-Transmembran-Typ-I-Rezeptor (IL-1 RI) wird auf T-Zellen, Fibroblasten, Keratinozyten, Endothelzellen, Synovialschleimzellen, Chondrozyten und Hepatozyten exprimiert. Der 68 kDa Transmembran-Typ-II-Rezeptor (IL-1 RII) wird auf B-Zellen, Neutrophilen und Knochenmarkszellen exprimiert. Die beiden IL-1-Rezeptortypen weisen eine Homologie von etwa 28 % in ihren extrazellulären Domänen auf, unterscheiden sich jedoch erheblich darin, dass der Typ-II-Rezeptor eine zytoplasmatische Domäne von nur 29 aa aufweist, während der Typ-I-Rezeptor eine zytoplasmatische Domäne von 213 aa aufweist. IL-1 RII scheint keine Reaktion auf IL-1 zu signalisieren und könnte als Lockrezeptor fungieren, der die IL-1-Funktion abschwächt. Das IL-1-Rezeptor-Akzessorprotein (IL-1 RAcP) assoziiert mit IL-1 RI und ist für die IL-1 RI-Signaltransduktion erforderlich. IL-1ra ist ein sekretiertes Molekül, das als kompetitiver Inhibitor von IL-1 fungiert. Lösliche Formen von IL-1 RI und IL-1 RII wurden in menschlichem Plasma, Synovialflüssigkeit und den konditionierten Medien mehrerer menschlicher Zelllinien nachgewiesen. Darüber hinaus werden IL-1-bindende Proteine, die löslichem IL-1 RII ähneln, von Vaccinia- und Kuhpockenviren kodiert.
IL-1 alpha und IL-1 beta sind strukturell verwandte Polypeptide, die etwa 25 % Homologie auf Aminosäureebene (aa) aufweisen. Beide werden als 31-kDa-Vorläufer synthetisiert, die anschließend in reife Proteine von etwa 17,5 kDa gespalten werden. Die Spaltung des IL-1-Beta-Vorläufers durch Caspase-1/ICE ist ein wichtiger Schritt in der Entzündungsreaktion. Weder IL-1 alpha noch IL-1 beta enthalten ein typisches hydrophobes Signalpeptid, es gibt jedoch Hinweise darauf, dass diese Faktoren über nicht klassische Wege sezerniert werden können. Ein Teil des unverarbeiteten IL-1-alpha kann auf der Zellmembran präsentiert werden und behält möglicherweise seine biologische Aktivität. Die Vorläuferform von IL-1 Beta zeigt im Gegensatz zur IL-1 Alpha-Vorläuferform im Vergleich zur verarbeiteten Form nur geringe oder keine biologische Aktivität. Sowohl unverarbeitete als auch reife Formen von IL-1 Beta werden aus der Zelle exportiert.
IL-1 alpha und IL-1 beta üben ihre Wirkung über Rezeptoren der Immunglobulin-Superfamilie aus, die zusätzlich IL-1ra binden. Der 80-kDa-Transmembran-Typ-I-Rezeptor (IL-1 RI) wird auf T-Zellen, Fibroblasten, Keratinozyten, Endothelzellen, Synovialschleimzellen, Chondrozyten und Hepatozyten exprimiert. Der 68 kDa Transmembran-Typ-II-Rezeptor (IL-1 RII) wird auf B-Zellen, Neutrophilen und Knochenmarkszellen exprimiert. Die beiden IL-1-Rezeptortypen weisen eine Homologie von etwa 28 % in ihren extrazellulären Domänen auf, unterscheiden sich jedoch erheblich darin, dass der Typ-II-Rezeptor eine zytoplasmatische Domäne von nur 29 aa aufweist, während der Typ-I-Rezeptor eine zytoplasmatische Domäne von 213 aa aufweist. IL-1 RII scheint keine Reaktion auf IL-1 zu signalisieren und könnte als Lockrezeptor fungieren, der die IL-1-Funktion abschwächt. Das IL-1-Rezeptor-Akzessorprotein (IL-1 RAcP) assoziiert mit IL-1 RI und ist für die IL-1 RI-Signaltransduktion erforderlich. IL-1ra ist ein sekretiertes Molekül, das als kompetitiver Inhibitor von IL-1 fungiert. Lösliche Formen von IL-1 RI und IL-1 RII wurden in menschlichem Plasma, Synovialflüssigkeit und den konditionierten Medien mehrerer menschlicher Zelllinien nachgewiesen. Darüber hinaus werden IL-1-bindende Proteine, die löslichem IL-1 RII ähneln, von Vaccinia- und Kuhpockenviren kodiert.
Typische Daten
|
pg/ml |
Außendurchmesser |
Durchschnittlich |
Korrigiert |
|
|
0.00 |
0.0651 |
0.0701 |
0.0676 |
|
|
15.63 |
0.1104 |
0.1143 |
0.1124 |
0.0448 |
|
31.25 |
0.1660 |
0.1609 |
0.1635 |
0.0959 |
|
62.50 |
0.2623 |
0.2676 |
0.2650 |
0.1974 |
|
125.00 |
0.4740 |
0.4650 |
0.4695 |
0.4019 |
|
250.00 |
0.8593 |
0.8316 |
0.8455 |
0.7779 |
|
500.00 |
1.5070 |
1.6060 |
1.5565 |
1.4889 |
|
1000.00 |
2.7780 |
2.8080 |
2.7930 |
2.7254 |
Präzision
|
Intra-Assay-Präzision |
Präzision zwischen Assays |
|||||
|
Probennummer |
S1 |
S2 |
S3 |
S1 |
S2 |
S3 |
|
22 |
22 |
22 |
6 |
6 |
6 |
|
|
Durchschnitt (pg/ml) |
18.9 |
93.0 |
290.2 |
17.4 |
97.5 |
280.7 |
|
Standardabweichung |
1.0 |
4.5 |
16.9 |
2.3 |
8.5 |
14.6 |
|
Variationskoeffizient (%) |
5.3 |
4.9 |
5.8 |
6.1 |
6.1 |
5.7 |
Inter-Assay-Präzision (Präzision zwischen Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden sechsmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.
Spike-Wiederherstellung
Die Spike-Erholung wurde durch Zugabe von 3 Konzentrationen von Maus-IL-1-beta in eine gesunde Mausserumprobe bewertet. Das nicht aufgestockte Serum wurde in diesem Experiment als Blindprobe verwendet.
Die Wiederherstellung lag zwischen 81 % und 111 % mit einer durchschnittlichen Gesamtwiederherstellung von 98 %.
Die Wiederherstellung lag zwischen 81 % und 111 % mit einer durchschnittlichen Gesamtwiederherstellung von 98 %.
Beispielwerte
| Beispielmatrix | Probe ausgewertet | Bereich (pg/ml) | Nachweisbar (%) | Mittelwert der nachweisbaren Menge (pg/ml) |
|---|---|---|---|---|
| Serum | 30 | n.d.-3,66 | 13 | 1.08 |
Serum/Plasma – Dreißig Proben von scheinbar gesunden Mäusen wurden in diesem Test auf das Vorhandensein von IL-1β untersucht. Von den Spendern lagen keine Krankengeschichten vor. n.d. = nicht-nachweisbar. Proben, die unterhalb der Empfindlichkeit liegen, gelten als nicht nachweisbar.
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