Human-VEGF-ELISA-Kit

Der vaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor (VEGF oder VEGF-A), auch bekannt als vaskulärer Permeabilitätsfaktor (VPF), ist ein wirksamer Mediator sowohl der Angiogenese als auch der Vaskulogenese beim Fötus und Erwachsenen. Es ist ein Mitglied der PDGF-Familie, das durch das Vorhandensein von acht konservierten Cysteinresten in einer Cystinknotenstruktur und die Bildung antiparalleler Disulfid-verknüpfter Dimere gekennzeichnet ist. Menschen exprimieren abwechselnd gespleißte Isoformen mit einer Länge von 121, 145, 165, 183, 189 und 206 Aminosäuren (aa). VEGF165 scheint die am häufigsten vorkommende und wirksamste Isoform zu sein, gefolgt von VEGF121 und VEGF189. Andere Isoformen als VEGF121 enthalten basische Heparin-Bindungsregionen und sind nicht frei diffundierbar. Humaner VEGF165 teilt 88 % der AA-Sequenzidentität mit entsprechenden Regionen von Maus- und Ratten-VEGF. VEGF wird in mehreren Zellen und Geweben exprimiert, darunter Skelett- und Herzmuskelzellen, Hepatozyten, Osteoblasten, Neutrophile, Makrophagen, Keratinozyten, braunes Fettgewebe, CD34+-Stammzellen, Endothelzellen, Fibroblasten und glatte Gefäßmuskelzellen. Die VEGF-Expression wird durch Hypoxie und Zytokine wie IL-1, IL-6, IL-8, Oncostatin M und TNF-alpha induziert. VEGF-Isoformen werden während der Entwicklung und im Erwachsenenalter unterschiedlich exprimiert. - VEGF-Dimere binden an zwei verwandte Rezeptortyrosinkinasen, VEGF R1 (auch Flt-1 genannt) und VEGF R2 (Flk-1/KDR), und induzieren deren Homodimerisierung und Autophosphorylierung. Diese Rezeptoren haben sieben extrazelluläre Immunglobulin-ähnliche Domänen und eine intrazelluläre geteilte Tyrosinkinase-Domäne. Sie werden auf vaskulären Endothelzellen und einer Reihe von Nichtendothelzellen exprimiert. Obwohl die VEGF-Affinität für die Bindung an VEGF R1 am höchsten ist, scheint VEGF R2 der primäre Mediator der angiogenen VEGF-Aktivität zu sein. VEGF165 bindet auch den Semaphorinrezeptor Neuropilin-1, der die Komplexbildung mit VEGF R2 fördert. - VEGF ist vor allem für seine Rolle bei der Vaskulogenese bekannt. Während der Embryogenese reguliert VEGF die Proliferation, Migration und das Überleben von Endothelzellen und reguliert so die Dichte und Größe der Blutgefäße, spielt jedoch keine Rolle bei der Bestimmung der Gefäßmuster. VEGF fördert die Knochenbildung durch die Rekrutierung von Osteoblasten und Chondroblasten und ist außerdem ein Chemoattraktant für Monozyten. Nach der Geburt erhält VEGF die Integrität der Endothelzellen aufrecht und ist ein starkes Mitogen für Mikro- und makrovaskuläre Endothelzellen. Bei Erwachsenen spielt VEGF hauptsächlich eine Rolle bei der Wundheilung und im weiblichen Fortpflanzungszyklus. In erkrankten Geweben fördert VEGF die Gefäßpermeabilität. Es wird daher angenommen, dass es zur Tumormetastasierung beiträgt, indem es sowohl die Extravasation als auch die Tumorangiogenese fördert. Verschiedene Strategien wurden therapeutisch eingesetzt, um die VEGF-vermittelte Tumorangiogenese zu antagonisieren. Zirkulierende VEGF-Spiegel korrelieren mit der Krankheitsaktivität bei Autoimmunerkrankungen wie rheumatoider Arthritis, Multipler Sklerose und systemischem Lupus erythematodes.

pg/ml	Außendurchmesser		Durchschnittlich	Korrigiert
0.00	0.0275	0.0264	0.0270
31.25	0.1190	0.1082	0.1136	0.0867
62.50	0.1991	0.2040	0.2016	0.1746
125.00	0.3159	0.2863	0.3011	0.2742
250.00	0.5521	0.6045	0.5783	0.5514
500.00	1.1560	1.2260	1.1910	1.1641
1000.00	2.3170	2.2130	2.2650	2.2381
2000.00	3.6280	3.4990	3.5635	3.5366

	Intra-Assay-Präzision			Präzision zwischen Assays
Probennummer	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Durchschnitt (pg/ml)	53.2	229.1	694.5	31.6	160.6	438.1
Standardabweichung	3.6	13.3	38.4	2.1	8.2	13.6
Variationskoeffizient (%)	6.8	5.8	5.5	6.5	5.1	3.1

Intra-Assay-Präzision (Präzision innerhalb eines Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden zwanzigmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.

Inter-Assay-Präzision (Präzision zwischen Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden sechsmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.

Die Spike-Erholung wurde durch Zugabe von 3 Konzentrationen an humanem VEGF/VEGFA in eine gesunde Humanserumprobe bewertet. Das nicht aufgestockte Serum wurde in diesem Experiment als Blindprobe verwendet.

Die Wiederherstellung lag zwischen 94 % und 119 %, mit einer durchschnittlichen Gesamtwiederherstellung von 105 %.

Beispielmatrix	Probe Bewertet	Reichweite (pg/ml)	Erkennbar %	Mittelwert von nachweisbar (pg/ml)
Serum	30	25,21-450,32	100.0	185.52

Serum/Plasma – Dreißig Proben von scheinbar gesunden Freiwilligen wurden in diesem Test auf das Vorhandensein von VEGF untersucht. Von den Spendern lagen keine Krankengeschichten vor.