Humanes OX40/TNFRSF4 ELISA-Kit

OX40 (CD134; TNFRSF4) ist ein T-Zell-kostimulatorisches Molekül der TNF-Rezeptor-Superfamilie, das mit anderen membrangebundenen Kostimulatoren wie CD28, CD40, CD30, CD27 und 4-1BB koordiniert. OX40 wird auf naiven CD4+ T-Zellen erst nach Aktivierung des TCR durch antigenpräsentierende Zellen (APC; dendritische und B-Zellen) und Kostimulation durch CD40/CD40-Ligand und CD28/B7 exprimiert. Sie erreicht ihr Maximum 2–5 Tage nach der Aktivierung bzw. 4 Stunden nach der Reaktivierung der Gedächtnis-T-Zellen. Humanes OX40 ist ein 48 kDa Typ-I-Transmembranglykoprotein mit einer Signalsequenz von 28 Aminosäuren (aa), einer extrazellulären Domäne (ECD) von 185 aa, die vier TNFR-Cys-Wiederholungen und eine O-glycosylierte Gelenkregion aufweist, einem 20 aa großen Transmembransegment und einer zytoplasmatischen Domäne von 41 aa. Der ECD von menschlichem OX40 zeigt 71 %, 68 %, 67 %, 64 % bzw. 64 % Identität mit dem OX40-ECD von Katzen, Hunden, Kaninchen, Mäusen und Ratten. Die Bindung von OX40 an aktivierten CD4+ T-Zellen durch den OX40-Liganden an aktivierten dendritischen Zellen fördert das Überleben und die Proliferation von T-Zellen, verlängert die Immunantwort und erhöht die Anzahl der Zellen, die den Übergang von Effektor- zu Gedächtnis-T-Zellen vollziehen. Die OX40-Signaltransduktion umfasst die Bindung von TNF-Rezeptor-assoziierten Faktoren (TRAFs) und die Aktivierung von NF-Kappa-B- und PI3-Kinase, um die Expression von Zytokinen, Mitgliedern der antiapoptotischen Bcl-2-Familie, Survivin und dem Chemokinrezeptor CXCR5 zu steigern. CXCR5 fördert die Migration von T-Zellen zu Keimzentren, um B-Zellen zu unterstützen. Studien mit Knockout- oder transgenen Mäusen und agonistischen oder blockierenden Antikörpern zeigen, dass die OX40/OX40L-Wechselwirkung entscheidend für die Etablierung oder Reaktivierung von Gedächtnis-T-Zellen und die Zerstörung der Immuntoleranz ist. Die Blockade des OX40-Engagements ist in Tiermodellen für allergische Atemwegsentzündungen, Graft-versus-Host-Erkrankungen und Autoimmunerkrankungen wirksam.

pg/ml	Außendurchmesser		Durchschnittlich	Korrigiert
0.00	0.0168	0.0150	0.0159
12.29	0.0413	0.0360	0.0387	0.0228
30.72	0.0754	0.0717	0.0736	0.0577
76.80	0.1554	0.1469	0.1512	0.1353
192.00	0.3511	0.3457	0.3484	0.3325
480.00	0.8416	0.8055	0.8236	0.8077
1200.00	1.8010	1.8460	1.8235	1.8076
3000.00	3.1860	3.2240	3.2050	3.1891

	Intra-Assay-Präzision			Präzision zwischen Assays
Probennummer	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Durchschnitt (pg/ml)	68.3	374.5	1141.6	69.2	348.2	1106.9
Standardabweichung	2.1	23.5	44.4	3.9	12.7	52.2
Variationskoeffizient (%)	3.0	6.3	3.9	5.6	3.7	4.7

Intra-Assay-Präzision (Präzision innerhalb eines Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden zwanzigmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.
Inter-Assay-Präzision (Präzision zwischen Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden sechsmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.

Die Spike-Erholung wurde durch Zugabe von 3 Konzentrationen von humanem OX40/TNFRSF4 in eine gesunde Humanserumprobe bewertet. Das nicht aufgestockte Serum wurde in diesem Experiment als Blindprobe verwendet.
Die Wiederherstellung lag zwischen 93 % und 120 % mit einer durchschnittlichen Gesamtwiederherstellung von 103 %.

Beispielmatrix	Probe ausgewertet	Bereich (pg/ml)	Nachweisbar (%)	Mittelwert der nachweisbaren Menge (pg/ml)
Serum	30	19,5-94,28	100	59.08

Serum/Plasma – Dreißig Proben von scheinbar gesunden Freiwilligen wurden in diesem Test auf das Vorhandensein von OX40/TNFRSF4 untersucht. Von den Spendern lagen keine Krankengeschichten vor.