Humanes IL-8/CXCL8 ELISA-Kit

Interleukin-8 (IL-8), auch bekannt als IL-8, GCP-1 und NAP-1, ist ein Heparin-bindendes 8-9 kDa-Mitglied der Alpha- oder CXC-Familie der Chemokine. Es gibt mindestens 15 Mitglieder der menschlichen CXC-Familie, die alle eine Struktur aus drei Beta-Faltblättern und einer Alpha-Helix annehmen. Die meisten CXC-Chemokine zeigen ein N-terminales Glu-Leu-Arg (ELR)-Tripeptidmotiv. IL-8 zirkuliert als Monomer, Homodimer und Heterodimer mit CXCL4/PF4. Das Monomer gilt als das bioaktivste, während das Heterodimer die PF4-Aktivität verstärken kann. Die Oligomerisierung von IL-8 wird durch seine Wechselwirkungen mit Matrix- und Zelloberflächen-Glykosaminoglykanen (GAGs) moduliert. Reifes menschliches IL-8 teilt 65-69 % der Aminosäureidentität (aa) mit IL-8 von Hunden, Katzen und Schweinen. Bei Nagetieren gibt es kein Gegenstück zum IL-8-Gen. - Mehrere Isoformen von IL-8 werden sowohl durch alternatives Spleißen als auch durch differenzielle proteolytische Spaltung erzeugt. Beim Menschen erzeugt alternatives Spleißen eine Isoform mit einer elf Aminosäuren-Substitution am C-Terminus. Die proteolytische Verarbeitung führt zur N-terminalen Verkürzung von IL8 und ist wahrscheinlich ein zellspezifisches Ereignis. Beispielsweise erzeugen Fibroblasten und Endothelzellen die 1-77-Form durch Spaltung von IL-8 nach Glu21, während Monozyten und Lymphozyten die 6-77-Form durch Spaltung nach Leu25 erzeugen. Diese verkürzten Formen zeigen im Allgemeinen eine erhöhte Bioaktivität, insbesondere durch den CXCR1-Rezeptor. IL-8 kann auch an Arg27 des Vorläufers einer Citrullinierung unterliegen, einer Modifikation, die seine Halbwertszeit und seine Fähigkeit, Leukozytose zu induzieren, erhöht. Eine Vielzahl von Zellen sezernieren IL-8, darunter Monozyten und Neutrophile, Fibroblasten und Keratinozyten, Mastzellen, viszerale glatte Muskelzellen, dendritische Zellen, große Alveolarzellen vom Typ II und Endothelzellen. - Die Bioaktivität von IL-8 wird durch zwei G-Protein-gekoppelte Rezeptoren vermittelt, die als CXCR1/IL-8 RA und CXCR2/IL-8 RB bezeichnet werden. CXCR1 ist 45-50 kDa groß und wird fast ausschließlich von IL-8 verwendet. CXCR2 ist 35-40 kDa groß und wird von fast allen CXC-Chemokinen verwendet. Sowohl CXCR1 als auch CXCR2 assoziieren konstitutiv zu funktionellen Homodimeren. Sie können auch heterodimerisieren, diese Komplexe dissoziieren jedoch nach der IL-8-Bindung. CXCR2 reagiert auf niedrige Konzentrationen von IL-8 und ist hauptsächlich mit Chemotaxis und MMP-9-Freisetzung verbunden. Im Gegensatz dazu reagiert CXCR1 auf hohe Konzentrationen von IL-8 und ist mit Atemstillstand und Phospholipase D2-Aktivierung verbunden. Somit induziert die CXCR2-Ligation die Leukozytenadhäsion an aktiviertem Gefäßendothel und die Migration zu Entzündungsherden, während die CXCR1-Ligation die antimikrobielle Aktivität von Neutrophilen fördert. IL-8 kann auch einen Komplex mit Serpin A1/alpha-1-Antitrypsin bilden, was die Interaktion von IL-8 mit CXCR1 verhindert. - Zusätzlich zu seinen entzündungsfördernden Wirkungen ist IL-8 an der Angiogenese und der Pathogenese von Arteriosklerose und Krebs beteiligt. Es induziert die VEGF-Expression in Gefäßendothelzellen und fungiert als autokriner Faktor für EC-Wachstum und Angiogenese. Bei atherosklerotischen Läsionen ist es hochreguliert und nach einem Myokardinfarkt im Serum und in der Liquor cerebrospinalis erhöht. Bei Krebs fördert IL-8 den epithelialen/mesenchymalen Übergang sowie die Invasivität und Metastasierung von Tumorzellen.

pg/ml	Außendurchmesser		Durchschnittlich	Korrigiert
0.00	0.0381	0.0373	0.0377
4.12	0.0493	0.0533	0.0513	0.0136
12.35	0.0743	0.0785	0.0764	0.0387
37.04	0.1583	0.1604	0.1594	0.1217
111.11	0.3773	0.3767	0.377	0.3393
333.33	0.9294	0.9447	0.9371	0.8994
1000.00	2.3256	2.3424	2.3340	2.2963
3000.00	4.0171	4.1382	4.0777	4.0400

	Intra-Assay-Präzision			Präzision zwischen Assays
Probennummer	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Durchschnitt (pg/ml)	54.3	279.3	896.1	51.2	259.7	780.4
Standardabweichung	1.9	8.3	31.3	3.4	14.2	25.7
Variationskoeffizient (%)	3.4	3	3.5	6.7	5.5	3.3

Intra-Assay-Präzision (Präzision innerhalb eines Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden zwanzigmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.

Inter-Assay-Präzision (Präzision zwischen Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden sechsmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.

Die Spike-Erholung wurde durch Zugabe von 3 Konzentrationen von menschlichem IL-8 zu einer gesunden menschlichen Serumprobe bewertet. Das nicht aufgestockte Serum wurde in diesem Experiment als Blindprobe verwendet.
Die Erholung reichte von 84 % bis 117 % mit einer durchschnittlichen Gesamtwiederherstellung von 102 %.

Beispielmatrix	Probe ausgewertet	Bereich (pg/ml)	Nachweisbar (%)	Mittelwert der nachweisbaren Menge (pg/ml)
Serum	30	43,4-359,3	100	127.2

Serum/Plasma – Dreißig Proben von scheinbar gesunden Freiwilligen wurden in diesem Test auf das Vorhandensein von IL-8 untersucht. Von den Spendern lagen keine Krankengeschichten vor.