Humanes CTLA-4 ELISA-Kit

Hauptmerkmale und Details

  • Spezifikation: 96 Test
  • Empfindlichkeit: 1,33 pg/ml (50 μl);1,97 pg/ml (10 μl);
  • Standardkurvenbereich: 2,74–2000 pg/ml
  • Standardkurvensteigung: 7 Punkte/3 Falten
  • Anzahl der Inkubationen: 2
  • Probenvolumen: 50 μl/10 μl
  • Testtyp: Sandwich Elisa
  • Betriebsdauer: 120min
  • Marke:
KAT.-NR. : AEH0179
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Größe:
96T
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Produktdetails
Hintergrund
CTLA-4 (zytotoxischer T-Lymphozyten-4, bezeichnet als CD152) ist ein Typ-I-Transmembran-T-Zell-inhibitorisches Molekül, das zur Ig-Superfamilie gehört. Die CTLA-4-cDNA von Mensch oder Maus kodiert für 223 Aminosäuren (aa), einschließlich einer Signalsequenz von 35 aa, einer extrazellulären Domäne (ECD) von 126 aa mit einer Ig-like V--Typ-Domäne, einer Transmembransequenz (TM) von 21 aa und einer zytoplasmatischen Sequenz von 41 aa. Es liegt als kovalentes Homodimer mit 41–43 kDa vor. Innerhalb der ECD teilt menschliches CTLA-4 68 %, 71 % bzw. 83–86 % AA-Sequenzidentität mit CTLA-4 von Maus, Ratte und Schwein/Rind/Kaninchen/Katze/Hund. Möglicherweise wird eine 174-aa-Form sezerniert, der TM und zytoplasmatische Sequenzen fehlen (sCTLA-4). Es werden Isoformen mit 56–79 Aminosäuren beschrieben, die hauptsächlich Teile der zytoplasmatischen Domäne enthalten. Bei Mäusen weist eine Isoform, der die Ig-like-Domäne fehlt, eine ligandenunabhängige Hemmwirkung auf und wird als liCTLA-4 bezeichnet. CD28, das strukturell mit CTLA-4 verwandt ist, wird konstitutiv auf naiven T-Zellen exprimiert und fördert die T-Zell-Aktivierung, wenn es von B7-2 auf antigenpräsentierenden Zellen (APC) innerhalb der immunologischen Synapse (IS) aktiviert wird. Im Gegensatz dazu wird CTLA-4 ab 1, 2 Tagen nach der T-Zell-Aktivierung aus intrazellulären Vesikeln zum IS rekrutiert. Es bildet mit B7-1 auf APC ein lineares Gitter, das negative regulatorische Signale induziert und die T-Zell-Aktivierung beendet. Abatacept, ein therapeutisches menschliches CTLA-4-Ig-Fusionsprotein (Handelsname Orencia), konkurriert mit CD28 um die Bindung von B7-1 und B7-2 und wurde verwendet, um die T-Zell-Aktivierung bei Autoimmunerkrankungen zu antagonisieren und das Transplantatüberleben zu verbessern. Mäuse, denen CTLA-4 fehlt, zeigen bis nach der Geburt keine Anomalien, entwickeln dann aber tödliche Autoimmunreaktionen aufgrund der fortgesetzten T-Zell-Aktivierung und der schlechten Kontrolle durch regulatorische T-Zellen, die CTLA-4 bei Wildtyp-Mäusen und Menschen konstitutiv exprimieren.
Typische Daten

pg/ml

Außendurchmesser

Durchschnittlich

Korrigiert

0.00

0.0105

0.0103

0.0104

2.74

0.0171

0.0159

0.0165

0.0061

8.23

0.0282

0.0271

0.0277

0.0173

24.69

0.0616

0.0611

0.0614

0.0510

74.07

0.1683

0.1480

0.1582

0.1478

222.22

0.5143

0.4790

0.4967

0.4863

666.67

1.5540

1.5790

1.5665

1.5561

2000.00

3.9590

3.9100

3.9345

3.9241

Präzision

Intra-Assay-Präzision

Präzision zwischen Assays

Probennummer

S1

S2

S3

S1

S2

S3

22

22

22

6

6

6

Durchschnitt (pg/ml)

53.1

266.2

814.9

17.2

77.5

231.4

Standardabweichung

2.9

9.1

34.8

1.3

5.1

12.0

Variationskoeffizient (%)

5.5

3.4

4.3

7.8

6.6

5.2

Intra-Assay-Präzision (Präzision innerhalb eines Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden zwanzigmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.
Inter-Assay-Präzision (Präzision zwischen Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden sechsmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.
Spike-Wiederherstellung
Die Spike-Erholung wurde durch Zugabe von 3 Konzentrationen von humanem CTLA-4 in eine gesunde Humanserumprobe bewertet. Das nicht aufgestockte Serum wurde in diesem Experiment als Blindprobe verwendet.
Die Wiederherstellung lag zwischen 91 % und 97 %, mit einer durchschnittlichen Gesamtwiederherstellung von 94 %.
Beispielwerte
Beispielmatrix Probe ausgewertet Bereich (pg/ml) Nachweisbar (%) Mittelwert der nachweisbaren Menge (pg/ml)
Serum 30 0,31-3,78 100 1.11

Serum/Plasma – Dreißig Proben von scheinbar gesunden Freiwilligen wurden in diesem Test auf das Vorhandensein von CTLA-4 untersucht. Von den Spendern lagen keine Krankengeschichten vor.

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