Humanes CCL5/RANTES ELISA-Kit

RANTES (Regulated upon Activation, Normal T cell Expressed and presumably Secreted), auch bekannt als CCL5, ist ein Mitglied der „CC“-Unterfamilie der Chemokine. Es spielt eine wichtige Rolle bei der entzündlichen Immunantwort durch seine Fähigkeit, Leukozyten chemoanzuziehen und ihre Funktion zu modulieren. Die cDNA für RANTES wurde ursprünglich durch subtraktive Hybridisierung als T-Zell-spezifische Sequenz entdeckt. Menschliche RANTES-cDNA kodiert für ein hochbasisches Vorläuferpolypeptid mit 91 Aminosäureresten (aa) und einem hydrophoben Signalpeptid mit 23 aa, das gespalten wird, um das reife Protein mit 68 aa zu erzeugen. Menschliches RANTES weist auf dem abgeleiteten aa-Level etwa 85 % Homologie mit Maus-RANTES auf.
RANTES ist ein wirksamer Chemoattraktant für eine Reihe verschiedener Zelltypen, darunter nicht stimulierte CD4+/CD45RO+-Gedächtnis-T-Zellen und stimulierte CD4+- und CD8+-T-Zellen mit naiven und Gedächtnis-Phänotypen, NK-Zellen, Basophile, Eosinophile, dendritische Zellen, Mastzellen, Monozyten und Mikroglia. Zusätzlich zu seinen Auswirkungen auf die Migration kann RANTES eine Reihe von Zelltypen aktivieren, darunter T-Zellen, Monozyten, Neutrophile, NK-Zellen, dendritische Zellen und Astrozyten. Die Aktivierung von T-Zellen erfordert im Allgemeinen relativ hohe RANTES-Konzentrationen (~ 1 μM) und hängt von der Aggregation des Moleküls und der Assoziation mit Zelloberflächen-Glykosaminoglykanen (GAGs) ab. Ob dies [es fehlen einige Worte, wahrscheinlich „Aktivität tritt in vivo auf“] bleibt unklar, obwohl bei Mäusen intraperitoneal injizierte RANTES-Mutanten, die nicht in der Lage sind, GAG zu aggregieren und/oder zu binden, im Vergleich zu Wildtyp-Kontrollen nicht in der Lage sind, Leukozyten anzuziehen. Andere In-vivo-Studien zeigen, dass RANTES-Knockout-Mäuse eine unzureichende Rekrutierung von Leukozyten an Stellen mit akuter Entzündung aufweisen. - Es ist bekannt, dass RANTES mit vier identifizierten sieben Transmembran-G-Protein-gekoppelten Rezeptoren interagiert: CCR1, CCR3, CCR4 und CCR5 (22-25). Die RANTES-Stimulation kann eine Vielzahl von Signalkaskaden auslösen, die vom Zellkontext abhängig sind. In T-Zellen kann RANTES beispielsweise einen Anstieg des intrazellulären Ca2+ und die Aktivierung der fokalen Adhäsionskinase (FAK), der Proteinkinase A, der PI3-Kinase, der Rho-GTPase und der JAK/STAT-Signalwege stimulieren. Das Cytomegalovirus-Protein US28 weist eine signifikante Homologie mit CC-Chemokinrezeptoren auf und ist in der Lage, RANTES zu binden. Membrandurchspannendes US28 kann je nach Kontext konstitutiv signalisieren, RANTES binden und G-Protein-vermittelte Signalkaskaden initiieren oder RANTES sequestrieren und möglicherweise Entzündungsreaktionen verändern.
Der RANTES-Rezeptor CCR5 ist auch der primäre Co-Rezeptor für R5-Varianten (M-Tropen) von HIV-1. Es wurde gezeigt, dass RANTES sowie die anderen CCR5-Liganden, das Makrophagen-Entzündungsprotein (MIP)-1 alpha und MIP-1 beta, die CCR5/HIV-1-Interaktion kompetitiv hemmen und Virusinfektionen in vitro unterdrücken können. Diese Effekte erfordern offenbar keine vollständig intakte Signalübertragung vom CCR5-Rezeptor. Folglich sind modifizierte Formen von RANTES und Nichtpeptidverbindungen, die die Interaktion von HIV-1 mit CCR5 blockieren, vielversprechend für zukünftige Therapien. Im Gegensatz dazu zeigen mehrere Berichte, dass RANTES die In-vitro-Replikation von X4 (T-tropic)-Varianten von HIV-1 verbessern kann, die CXCR4 als Co-Rezeptor anstelle von CCR5 verwenden. Diese Aktivität erfordert normalerweise relativ hohe RANTES-Konzentrationen (~μM) und hängt von der Interaktion mit GAGs auf der Zelloberfläche, der Oligomerisierung und der Aktivierung der Tyrosinkinase- und MAP-Kinase-Signalkaskaden ab.

pg/ml	Außendurchmesser		Durchschnittlich	Korrigiert
0.00	0.0151	0.0162	0.0157
13.72	0.0271	0.0288	0.0280	0.0123
41.15	0.0489	0.0496	0.0493	0.0336
123.46	0.1175	0.1189	0.1182	0.1025
370.37	0.3486	0.3520	0.3503	0.3346
1111.11	1.0108	0.9250	0.9679	0.9522
3333.33	1.8759	2.0533	1.9646	1.9489
10000.00	3.2985	3.1585	3.2285	3.2128

	Intra-Assay-Präzision			Präzision zwischen Assays
Probennummer	S1	S2	S3	S1	S2	S3
	22	22	22	6	6	6
Durchschnitt (pg/ml)	426.6	1631.6	3396	702.2	3412	8842.1
Standardabweichung	37.6	128.2	288.6	44.6	194.4	506.5
Variationskoeffizient (%)	8.8	7.9	8.5	6.4	5.7	5.7

Intra-Assay-Präzision (Präzision innerhalb eines Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden zwanzigmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.

Inter-Assay-Präzision (Präzision zwischen Assays) Drei Proben bekannter Konzentration wurden sechsmal auf einer Platte getestet, um die Intra-Assay-Präzision zu beurteilen.

Die Spike-Erholung wurde durch Zugabe von 3 Konzentrationen von humanem CCL5 in eine gesunde Humanserumprobe bewertet. Das nicht aufgestockte Serum wurde in diesem Experiment als Blindprobe verwendet.
Die Wiederherstellung lag zwischen 90 % und 106 %, mit einer durchschnittlichen Gesamtwiederherstellung von 97 %.

Beispielmatrix	Probe ausgewertet	Bereich (pg/ml)	Nachweisbar (%)	Mittelwert der nachweisbaren Menge (pg/ml)
Serum	30	943,0-38560,8	100	21207.7

Serum/Plasma – Dreißig Proben von scheinbar gesunden Freiwilligen wurden in diesem Test auf das Vorhandensein von CCL5 untersucht. Von den Spendern lagen keine Krankengeschichten vor.