Oversigt over Western Blot

Western blot, undertiden kaldet proteinimmunoblot, er en meget anvendt analytisk teknik i molekylærbiologi og immunogenetik for at detektere specifikke proteiner i en prøve af vævshomogenat eller ekstrakt. Udover at detektere proteiner anvendes denne teknik også til at visualisere, skelne og kvantificere forskellige proteiner i en kompleks proteinblanding.

Nøgletrin i Western blot -teknikken

Western blot -teknikken involverer tre hovedtrin: adskillelse efter størrelse, overførsel af proteiner til en fast understøttelse og markering af målproteinet ved hjælp af primære og sekundære antistoffer til visualisering. Et syntetisk eller dyr - afledt antistof (det primære antistof) oprettes for at genkende og binde til et specifikt målprotein. Elektroforese -membranen vaskes i en opløsning indeholdende det primære antistof, hvorefter overskydende antistof vaskes af. Derefter tilsættes et sekundært antistof, der genkender og binder til det primære antistof. Det sekundære antistof visualiseres ved forskellige metoder, såsom farvning, immunofluorescens og radioaktivitet, hvilket muliggør indirekte detektion af det specifikke målprotein.

Relaterede teknikker

Andre relaterede teknikker inkluderer dot blot -analyse, kvantitativ dot blot, immunohistokemi og immunocytokemi, hvor antistoffer bruges til at detektere proteiner i væv og celler ved immunfarvning såvel som enzym - forbundet immunosorbentassay (ELISA).