Exosome Extraction Kit (mælk)

Eksosomer er små vesikler (30 - 150nm) indeholdende RNA og protein, der udskilles af celler, som er rigelige i kropsvæsker som blod, spyt, urin og mælk. Eksosom anses for at have funktionen af ​​inter - cellulær messenger, der transmitterer deres effektorer eller signalmolekyler mellem specifikke celler. Imidlertid forbliver dens struktur, sammensætning af effektorer og den involverede biologiske vej i øjeblikket uklar.

I den biologiske funktionelle undersøgelse af eksosom er det nødvendigt at adskille sine komplette partikler, men den konventionelle ultracentrifugeringsmetode har komplicerede trin, høje krav til hardware og karakter af vanskelig drift. Det hurtige ekstraktionssæt af eksosom uafhængigt udviklet af Umibiois egnet til ekstraktion af eksosom i emulsionen efter optimering af komponenterne, som kan opnå høj - renhedseksosomale partikler hurtigt og effektivt. Det kan anvendes til elektronmikroskopianalyse, NTA -partikelstørrelsesanalyse, nukleinsyreanalyse, proteinanalyse, cytologiske eksperimenter, dyreforsøg osv.

Høj - Hastighedscentrifuge (op til 10000 g Centrifugalkraft), Vortex Oscillator; 50 ml centrifugalrotor, 50 ml centrifugalrør, 2 ml centrifugalrotor, 1,5 ml centrifugalrør, PBS -pufferopløsning.

* Nuklease - fri, steril

• · Dækker cellesupernatant, væv, urin, serum, plasma, mælk osv.
• · Høj prøvebehandlingskapacitet, op til 5 gange den for lignende produkter.
• · Eksosomer kan bruges til celle co - kultur og omics -forskning.
• · Dedikeret til kontinuerlig optimering af eksosomsæt til forskning og udvikling.
• · Bladet af over 300 kunder, og sikrer bekymring - Gratis køb og brug.
• · Omkostninger - Effektiv til støtte for stor - skalaundersøgelse, mens de sparer omkostninger.

I. Prøveforbehandling

1. prøveudtagning: I tilfælde af den frosne prøve skal du tage den ud fra køleskabet og optø den i et 25 ° C vandbad, og placer den fuldt - optøede prøve på isen; I tilfælde af den friske prøve skal du samle prøven og placere den på isen.

2. Indledende dosering af prøven: (prøvedosering til en enkelt ekstraktion)

3. centrifugering for at fjerne lipiderne: Overfør prøven til centrifugalrøret og centrifuger ved 4 ℃ ved 10000 g i 20 minutter for at fjerne lipiderne og nogle proteiner fra prøven;(Bemærk: Prøven er opdelt i tre lag efter centrifugering, hvor det øverste lag er et lipidlag, hvor det nedre lag er et proteinforfærning, og det midterste lag er valle). Efter centrifugering er tilstanden for det øverste lag "kompakt, stabil og ikke let at falde af". Hvis det øverste lag er "fluffy og let at falde af", og der er en masse bundfald i det nedre lag, kan dette trin gentages kontinuerligt, og det midterste lag væske skal tages efter hver centrifugering)

4. overførsel af valle: Overfør valle (midterste lag væske), hvis lipider er blevet fjernet til et nyt 50 ml centrifugalrør;(Bemærk: Det øverste lag af lipider kan punkteres af et spydspids og langsomt dumpes eller overføres med en pipette. Det er et normalt fænomen, at der er en lille mængde lipider og bundfald i den overførte valle, hvilket ikke vil påvirke efterfølgende eksperiment.)

II uren proteinfjernelse

1. Snutning af valle: Tilføj Løsning a ind i valle. Inverter centrifugalrøret for at blande det grundigt, indtil det er "gennemskinneligt". Tilføj derefter Løsning b og vend røret til at blande grundigt. Lad det stå ved 2 ℃ TO8 ℃ i 10 minutter; (Bemærk: Efter at den statiske placering er afsluttet, skal du ryste forsigtigt centrifugalrøret. “Tofu budding - lignende” fast stof vil blive præsenteret, og væsken vil være ”gennemsigtig”. Hvis tilstanden af ​​"tofu budding" ikke præsenteres, eller prøven stadig er "mælkehvide", kan der tilsættes passende mængde opløsning B, indtil væsken bliver "gennemsigtig".

Bemærk: Konverter specifikke doser, der skal tilsættes i henhold til andelen af ​​tabellen ovenfor.

2. centrifugering for at fjerne proteinet: centrifuge den bundfældede valle ved 4 ℃ ved 10000 g i 10 minutter og opsamle supernatanten;

3. Filtrering af supernatanten: Overfør den indsamlede supernatant til 50 ml centrifugering og filtreringskolonne og centrifuge ved 4 ℃ i 2 minutter ved 3000 g; (Bemærk: Hvis supernatanten ikke er fuldt filtreret, kan dette trin gentages. 50 ml centrifugerings- og filtreringskolonne er et engangsmateriale, og gentagen brug anbefales ikke.)

4. Overfør den filtrerede supernatant til det nye centrifugalrør, tilsættes Løsning c og vend den til at blande det grundigt; (Bemærk: Doseringen af ​​opløsning C skal være i overensstemmelse med doseringen af ​​opløsning B)

III Exosom -ekstraktion

1. forbehandling af supernatanten: Tilføj Løsning d ind i supernatanten tilsat Løsning c, og de specifikke doseringer er som følger:

Bemærk: Konverter andre doseringer i henhold til lige andel af reagensdoseringen i tabellen

2. Blanding af løsningen: Efter tilføjelse Løsning d, dæk tæt centrifugalrøret, og bland det jævnt ved hjælp af hvirveloscillatoren i 1 min. Lad det derefter stå ved 2 ℃ til 8 ℃ i mindst 2 timer; (Bemærk: Tilføjelse af den stående tid kan øge den eksosom opnåelsesgrad, men den stående tid må ikke overstige 24 timer)

3. udfældende eksosom: Tag centrifugalrøret ud med den blandede spiritus og lad det være centrifugeret ved 4 ℃ ved 10000 g I 60 minutter skal du kaste supernatanten, og nedbøren er rig på eksosomale partikler;(Bemærk: Supernatanten skal suges så meget som muligt)

4. Resuspendning af eksosomet: Tag 1 x PBS, spind centrifugering af bundfald (se følgende tabel for specifik dosering). Når den er opløst, skal du overføre den resuspenderede opløsning til et nyt 1,5 ml centrifugalrør;

Bemærk: Konverter andre doseringer i henhold til lige andel af reagensdoseringen i tabellen

5. Opnåelse af eksosomale partikler: centrifuger det 1,5 ml centrifugalrør med resuspenderet opløsning ved 4 ℃ ved 12000 g i 5 minutter og hold supernatanten. Denne supernatant er rig på eksosomale partikler. (Bemærk: I tilfælde af en stor mængde bundfald kan dette trin gentages flere gange, indtil der ikke er nogen åbenlyst nedbør. Saml supernatanten efter hver centrifugering. Exosomopløsningen kan have en let mælkeagtig hvid farve, som er normal)

6. Opbevaring af eksosomet: Oprensede eksosomer skal være sub - pakket til 50 - 100 μl og opbevares i et lavt - temperaturkøleskab ved - 80 ℃ til efterfølgende eksperimentel anvendelse.

IV opbevaringsbetingelser

Dette produkt kan opbevares stabilt ved stuetemperatur i 24 timer. Bland det grundigt inden brug.

V Forholdsregler

Dette produkt er kun for livsvidenskabelig forskning, og medicinsk diagnose eller andre formål er forbudt!