Eksosomekstraktion og oprensningssæt (serum - plasma)

Exosomer er små vesikler (30 - 150 nm) indeholdende RNA og protein, der udskilles af celler, som er rigelige i serum/plasma. Exosomer anses for at have funktionen af ​​inter - cellulær messenger, der transmitterer deres effektorer eller signalmolekyler mellem specifikke celler.

I den biologiske funktionelle undersøgelse af eksosom er det nødvendigt at adskille dens komplette partikler. Det hurtige ekstraktionssæt med serum/plasmaeksosom uafhængigt udviklet af Umibiois, der er egnet til ekstraktion af eksosom i serum/plasma efter optimering af komponenterne. Det hjælper med at få Høj - renhed Exosomale partikler hurtigt og effektivt.

Høj - Hastighedscentrifuge (med rotationshastighed op til 12000 o / min), hvirveloscillator; 1,5 ml centrifugalrør, PBS -pufferopløsning, ismaskine.

* Nuklease - fri, steril

• · Dækker cellesupernatant, væv, urin, serum, plasma, mælk osv.
• · Høj prøvebehandlingskapacitet, op til 5 gange den for lignende produkter.
• · Eksosomer kan bruges til celle co - kultur og omics -forskning.
• · Dedikeret til kontinuerlig optimering af eksosomsæt til forskning og udvikling.
• · Bladet af over 300 kunder, og sikrer bekymring - Gratis køb og brug.
• · Omkostninger - Effektiv til støtte for stor - skalaundersøgelse, mens de sparer omkostninger.

I. Prøveforbehandling

1.. Centrifuge skal være før - afkølet i 10 minutter ved 4 ℃ før brug;

2. prøveudtagning: I tilfælde af en frosset prøve, tø den ved 2 - 8 ℃ efter at have taget ud fra køleskabet; I tilfælde af en frisk prøve skal du opbevare den ved 2 - 8 ℃ efter opsamlet.

3. Under - Pakken prøven i henhold til 500 μl /rør, og udgør den utilstrækkelige del til 500 μl med 1 x PBS.

II uren proteinfjernelse

1. efter at have taget ud Løsning a Fra sættet skal du placere det i fryserlaget i køleskabet i mindst 1 time. Tag ud Pre - afkølet løsning a og placer den på brash - iirs;

2. Tilføjelse Løsning a: Tilsæt 400 μl Pre - afkølet løsning a I 500 μl blodprøve og dæk straks centrifugalrøret tæt, og bland det fuldt ud ved hjælp af hvirveloscillatoren i 30 sekunder;

3. centrifugering for at fjerne proteinet: centrifuge den jævnt blandede prøve ved 4 ℃ ved 12000 o / min i 20 minutter for at fjerne det urene protein i prøven;

4. overførsel af supernatanten: overfør den centrifugerede supernatant, hvis uren proteiner er blevet fjernet til et nyt 1,5 ml centrifugalrør;

III Exosom -ekstraktion

1. Tilføjelse Løsning b: Tilføj 120μl Løsning b ind i den centrifugerede supernatant, hvis uren proteiner er blevet fjernet;

2. Blanding af løsningen: Efter tilføjelse Løsning b, dæk tæt centrifugalrøret, og bland det fuldt ud ved hjælp af hvirveloscillatoren i 2 minutter. Lad det derefter stå i 5 minutter ved stuetemperatur;

3. udfældning af eksosomet: centrifuger centrifugalrøret med den blandede opløsning ved 4 ℃ ved 12000 o / min i 15 minutter og kasserer supernatanten;

4. Centrifugering igen: centrifuger centrifugalrøret med nedbør ved 4 ℃ ved 12000 o / min i 2 minutter og kasser supernatanten (Bemærk: Supernatanten skal suges så meget som muligt). Lad det 1,5 ml centrifugalrør være åben ved stuetemperatur for 10 min;

5. Resuspendning af eksosomet: Tag 200 μl 1 x PBS og spin det centrifugerede bundfald jævnt. Når den er opløst, skal du overføre den resuspenderede opløsning til et nyt 1,5 ml centrifugalrør;

6. Opnåelse af eksosomale partikler: centrifuge 1,5 ml centrifugalrør med resuspenderet opløsning ved 4 ℃ ved 12000 o / min i 2 minutter og hold supernatanten. Denne supernatant er rig på eksosomale partikler.

(Bemærk: På dette tidspunkt kan der være en stor mængde bundfald, som er et normalt fænomen)

IV Exosomoprensning

1. Rensning af eksosomet: Overfør det opnåede råprodukt af eksosomale partikler til det øverste kammer af eksosomrensningsfilter (EPF -kolonne) og centrifuge ved 4 ℃ ved 5600 o / min i 20 minutter. Efter centrifugeringen skal du samle væsken i bunden af ​​EPF -søjlen. Denne væske er de oprensede eksosomale partikler; (Bemærk: EPF -kolonner er ikke genanvendelige)

2. Opbevaring af eksosomet: Oprensede eksosomer skal være sub - pakket ved 50 - 100 μl og opbevares i et lavt - temperaturkøleskab ved - 80 ℃ til efterfølgende eksperimentel anvendelse.

V Opbevaringsbetingelser

Efter modtagelse af produktet skal du opbevare reagenserne separat. Bland det grundigt inden brug.

Løsning A: Transport ved stuetemperatur og opbevaring ved - 18 ℃ Efter at kittet er åbnet (fryserlaget i et konventionelt køleskab);

Løsning B: Opbevaring ved stuetemperatur;

EPF -kolonne: Opbevaring ved stuetemperatur;

V Forholdsregler

Dette produkt er kun for Life Science -undersøgelser!

Vi andre ting

For flere tekniske spørgsmål, kontakt Umibio for yderligere svar.