مجموعة استخراج الإكسوسوم (الحليب)

الإكسوسومات عبارة عن حويصلات صغيرة (30-150 نانومتر) تحتوي على الحمض النووي الريبوزي (RNA) والبروتين الذي تفرزه الخلايا، وهو متوفر بكثرة في سوائل الجسم مثل الدم واللعاب والبول والحليب. يعتبر الإكسوسوم لديه وظيفة الرسول بين الخلايا، حيث ينقل مؤثراته أو جزيئات الإشارة بين خلايا معينة. ومع ذلك، فإن هيكلها وتكوين مؤثراتها والمسار البيولوجي المعني بها لا يزال غير واضح حاليًا.

في الدراسة الوظيفية البيولوجية للإكسوسوم، من الضروري فصل جزيئاته الكاملة، لكن طريقة الطرد المركزي الفائق التقليدية لها خطوات معقدة ومتطلبات عالية للأجهزة وطبيعة التشغيل الصعبة. مجموعة الاستخراج السريع من Exosome التي تم تطويرها بشكل مستقل بواسطة Umibiois مناسبة لاستخراج exosome في المستحلب بعد تحسين المكونات، والتي يمكنها الحصول على جزيئات exosome عالية النقاء بسرعة وكفاءة. ويمكن تطبيقه على تحليل المجهر الإلكتروني، وتحليل حجم الجسيمات NTA، وتحليل الحمض النووي، وتحليل البروتين، والتجارب الخلوية، والتجارب على الحيوانات، وما إلى ذلك.

جهاز طرد مركزي عالي السرعة (يصل إلى 10000 g قوة الطرد المركزي)، مذبذب دوامة؛ دوار طرد مركزي 50 مل، أنبوب طرد مركزي 50 مل، دوار طرد مركزي 2 مل، أنبوب طرد مركزي 1.5 مل، محلول عازل PBS.

* نوكلياز-مجاني ومعقم

• · يغطي طاف الخلية والأنسجة والبول والمصل والبلازما والحليب، الخ.
• · قدرة عالية على معالجة العينات، تصل إلى 5 أضعاف قدرة المنتجات المماثلة.
• · يمكن استخدام الإكسوسومات في أبحاث الثقافة الخلوية وأبحاث الأوميكس.
• · مخصص للتحسين المستمر لمجموعات exosome للبحث والتطوير.
• · موثوق به من قبل أكثر من 300 عميل، مما يضمن عدم القلق - الشراء والاستخدام مجانًا.
• · فعالة من حيث التكلفة لدعم الأبحاث واسعة النطاق مع توفير التكاليف.

I. المعالجة المسبقة للعينة

1. أخذ العينات: في حالة العينة المجمدة، أخرجها من الثلاجة وقم بإذابتها في حمام مائي بدرجة حرارة 25 درجة مئوية، ثم ضع العينة المذابة بالكامل على الجليد؛ في حالة العينة الطازجة، جمع العينة ووضعها على الجليد.

2. الجرعة الأولية للعينة: (جرعة العينة لاستخراج واحد)

3. الطرد المركزي لإزالة الدهون: انقل العينة إلى أنبوب الطرد المركزي وأجهزة الطرد المركزي عند 4 درجة مئوية عند 10000 g لمدة 20 دقيقة لإزالة الدهون وبعض البروتينات من العينة؛(ملاحظة: يتم تقسيم العينة إلى ثلاث طبقات بعد الطرد المركزي، حيث تكون الطبقة العليا عبارة عن طبقة دهنية، والطبقة السفلية عبارة عن راسب بروتين، والطبقة الوسطى عبارة عن مصل اللبن). بعد الطرد المركزي، تكون حالة الطبقة العليا "مدمجة ومستقرة وليس من السهل أن تسقط". إذا كانت الطبقة العليا "رقيقة وسهلة التساقط" ويوجد الكثير من الرواسب في الطبقة السفلية، فيمكن تكرار هذه الخطوة بشكل مستمر ويتم أخذ سائل الطبقة الوسطى بعد كل عملية طرد مركزي)

4. نقل مصل اللبن: انقل مصل اللبن (سائل الطبقة الوسطى) الذي تمت إزالة الدهون فيه إلى أنبوب طرد مركزي جديد سعة 50 مل؛(ملاحظة: يمكن ثقب الطبقة العليا من الدهون بواسطة رأس الحربة وإلقائها ببطء، أو نقلها باستخدام ماصة. إنها ظاهرة طبيعية وجود كمية صغيرة من الدهون والرواسب في مصل اللبن المنقول، الأمر الذي لن يؤثر على التجربة اللاحقة.)

II إزالة البروتين غير النقي

1. تسوية مصل اللبن: إضافة الحل أ في مصل اللبن. اقلب أنبوب الطرد المركزي لخلطه جيدًا حتى يصبح "شفافًا". ثم أضف الحل ب وعكس الأنبوب لخلط جيدا. دعها تقف عند 2 درجة مئوية إلى 8 درجة مئوية لمدة 10 دقائق؛ (ملاحظة: بعد الانتهاء من الوضع الثابت، قم بهز أنبوب الطرد المركزي برفق. سيتم تقديم مادة صلبة "تشبه بودنغ التوفو" وسيكون السائل "شفافًا". إذا لم تظهر حالة "بودنغ التوفو" أو كانت العينة لا تزال "بيضاء الحليب"، فيمكن إضافة كمية مناسبة من المحلول "ب" حتى يتحول السائل إلى "شفاف".)

ملحوظة: يرجى تحويل الجرعات المحددة المراد إضافتها وفقًا لنسبة الجدول أعلاه.

2. الطرد المركزي لإزالة البروتين: قم بالطرد المركزي لمصل اللبن المستقر عند 4 درجات مئوية عند 10000 جم لمدة 10 دقائق وجمع المادة الطافية؛

3. تصفية المادة طافية: نقل المادة طافية التي تم جمعها إلى 50 مل عمود الطرد المركزي والترشيح وأجهزة الطرد المركزي عند 4 درجة مئوية لمدة 2 دقيقة في 3000 غرام؛ (ملاحظة: إذا لم يتم تصفية المادة طافية بشكل كامل، يمكن تكرار هذه الخطوة. عمود الطرد المركزي والترشيح سعة 50 مل هو مادة يمكن التخلص منها ولا يوصى بالاستخدام المتكرر.)

4. قم بنقل المادة الطافية المفلترة إلى أنبوب الطرد المركزي الجديد، وأضفها الحل ج واقلبها لخلطها جيدًا؛ (ملاحظة: يجب أن تكون جرعة المحلول C متوافقة مع جرعة المحلول B)

III استخراج الإكسوسوم

1. المعالجة المسبقة للطاف: إضافة الحل د في طاف المضافة الحل ج، والجرعات المحددة هي كما يلي:

ملحوظة: يرجى تحويل الجرعات الأخرى وفقًا لنسبة متساوية من جرعة الكاشف في الجدول

2. خلط المحلول : بعد الإضافة الحل د، قم بتغطية أنبوب الطرد المركزي بإحكام، واخلطه بالتساوي باستخدام مذبذب الدوامة لمدة دقيقة واحدة. ثم اتركه عند درجة حرارة 2 إلى 8 درجات مئوية لمدة ساعتين على الأقل؛ (ملاحظة: إضافة وقت الانتظار يمكن أن يزيد من معدل تحقيق الإكسوسوم، ولكن يجب ألا يتجاوز وقت الانتظار 24 ساعة)

3. ترسيب الإكسوسوم: أخرج أنبوب الطرد المركزي مع السائل المختلط واتركه ليتم طرده عند 4 درجة مئوية عند 10000 g لمدة 60 دقيقة، تجاهل المادة طافية، وهطول الأمطار غني بالجزيئات exosomal؛(ملاحظة: يجب أن يتم امتصاص المادة الطافية قدر الإمكان)

4. إعادة تعليق الإكسوسوم: خذ 1 × PBS، وقم بتدوير راسب الطرد المركزي (انظر الجدول التالي لمعرفة الجرعة المحددة). بعد أن يتم حله، نقل الحل مع وقف التنفيذ إلى أنبوب الطرد المركزي الجديد 1.5 مل؛

ملحوظة: يرجى تحويل الجرعات الأخرى وفقًا لنسبة متساوية من جرعة الكاشف في الجدول

5. الحصول على جزيئات exosomal: الطرد المركزي أنبوب الطرد المركزي 1.5 مل مع محلول معلق عند 4 درجة مئوية عند 12000 g لمدة 5 دقائق والحفاظ على طاف. هذا طاف غني بالجزيئات exosomal. (ملاحظة: في حالة وجود كمية كبيرة من الرواسب، يمكن تكرار هذه الخطوة لعدة مرات حتى لا يكون هناك هطول واضح. جمع المادة طافية بعد كل الطرد المركزي. قد يكون لمحلول الإكسوسوم لون أبيض حليبي فاتح، وهو أمر طبيعي)

6. تخزين الإكسوسوم: يجب تعبئة الإكسوسومات المنقاة في 50-100 ميكرولتر وتخزينها في ثلاجة ذات درجة حرارة منخفضة عند 80 درجة مئوية للاستخدام التجريبي اللاحق.

رابعا شروط التخزين

يمكن تخزين هذا المنتج بشكل ثابت في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة. يرجى مزجها جيدا قبل الاستخدام.

الاحتياطات V

هذا المنتج مخصص لأبحاث علوم الحياة فقط، ويحظر التشخيص الطبي أو أي أغراض أخرى!