مجموعة استخراج وتنقية الإكسوزوم (المصل-البلازما)

الإكسوسومات عبارة عن حويصلات صغيرة (30-150 نانومتر) تحتوي على الحمض النووي الريبوزي (RNA) والبروتين الذي تفرزه الخلايا، وهو متوفر بكثرة في المصل/البلازما. تعتبر الإكسوزومات لها وظيفة الرسول بين الخلايا، حيث تنقل مؤثراتها أو جزيئات الإشارة بين خلايا معينة.

في الدراسة الوظيفية البيولوجية للإكسوسوم، من الضروري فصل جزيئاته الكاملة. مجموعة الاستخراج السريع من Exosome المصل/البلازما التي تم تطويرها بشكل مستقل بواسطة Umibiois مناسبة لاستخراج الإكسوسوم في المصل/البلازما بعد تحسين المكونات. يساعد في الحصول على عالية-النقاء الجسيمات الإكسوسومية بسرعة وكفاءة.

جهاز طرد مركزي عالي السرعة (مع سرعة دوران تصل إلى 12000 دورة في الدقيقة)، مذبذب دوامي؛ أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل، محلول عازل PBS، ماكينة ثلج.

* نوكلياز-مجاني ومعقم

• · يغطي طاف الخلية والأنسجة والبول والمصل والبلازما والحليب، الخ.
• · قدرة عالية على معالجة العينات، تصل إلى 5 أضعاف قدرة المنتجات المماثلة.
• · يمكن استخدام الإكسوسومات في أبحاث الثقافة الخلوية وأبحاث الأوميكس.
• · مخصص للتحسين المستمر لمجموعات exosome للبحث والتطوير.
• · موثوق به من قبل أكثر من 300 عميل، مما يضمن عدم القلق - الشراء والاستخدام مجانًا.
• · فعالة من حيث التكلفة لدعم الأبحاث واسعة النطاق مع توفير التكاليف.

I. المعالجة المسبقة للعينة

1. يجب تبريد جهاز الطرد المركزي مسبقًا لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية قبل الاستخدام؛

2. أخذ العينات: في حالة العينة المجمدة، قم بإذابتها عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية بعد إخراجها من الثلاجة؛ في حالة وجود عينة جديدة، قم بتخزينها في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية بعد جمعها.

3. قم بتعبئة العينة وفقًا لـ 500 ميكرولتر / أنبوب، وقم بتعويض الجزء غير الكافي إلى 500 ميكرولتر باستخدام 1 × PBS.

II إزالة البروتين غير النقي

1. بعد الاخراج الحل أ من المجموعة، ضعيها في طبقة الفريزر بالثلاجة لمدة ساعة على الأقل. اخراج المحلول A المبرد مسبقًا ثم ضعه على ثلج ثلجي;

2. الإضافة الحل أ: أضف 400 ميكرولتر الحل المبرد مسبقًا أ في عينة دم 500 ميكرولتر وقم بتغطية أنبوب الطرد المركزي بإحكام على الفور، واخلطه بالكامل باستخدام مذبذب الدوامة لمدة 30 ثانية؛

3. الطرد المركزي لإزالة البروتين: قم بالطرد المركزي للعينة المختلطة بالتساوي عند 4 درجات مئوية عند 12000 دورة في الدقيقة لمدة 20 دقيقة لإزالة البروتين غير النقي في العينة؛

4. نقل المادة طافية: نقل المادة طافية الطرد المركزي التي تمت إزالة بروتيناتها غير النقية إلى أنبوب طرد مركزي جديد سعة 1.5 مل؛

III استخراج الإكسوسوم

1. الإضافة الحل ب: إضافة 120ميكرولتر الحل ب في طاف الطرد المركزي الذي تمت إزالة البروتينات غير النقية؛

2. خلط المحلول : بعد الإضافة الحل ب، قم بتغطية أنبوب الطرد المركزي بإحكام واخلطه بالكامل باستخدام مذبذب الدوامة لمدة دقيقتين. ثم اتركه لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة؛

3. تعجيل الإكسوسوم: الطرد المركزي لأنبوب الطرد المركزي مع المحلول المختلط عند 4 درجات مئوية عند 12000 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة وتجاهل المادة الطافية؛

4. الطرد المركزي مرة أخرى: قم بطرد أنبوب الطرد المركزي مع الترسيب عند 4 درجات مئوية عند 12000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين وتخلص من المادة الطافية (ملاحظة: يجب أن يتم امتصاص الطاف قدر الإمكان). اترك أنبوب الطرد المركزي 1.5 مل مفتوحًا في درجة حرارة الغرفة ل 10 دقائق؛

5. إعادة تعليق الإكسوسوم: خذ 200 ميكرولتر من 1 × PBS وقم بتدوير راسب الطرد المركزي بالتساوي. بعد أن يتم حله، نقل الحل مع وقف التنفيذ إلى أنبوب الطرد المركزي الجديد 1.5 مل؛

6. الحصول على جزيئات exosomal: أنبوب الطرد المركزي 1.5 مل مع محلول معلق عند 4 درجة مئوية عند 12000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين والحفاظ على المادة طافية. هذا طاف غني بالجزيئات exosomal.

(ملاحظة: في هذه المرحلة قد تكون هناك كمية كبيرة من الرواسب، وهي ظاهرة طبيعية)

الرابع تنقية Exosome

1. تنقية الإكسوسوم: انقل المنتج الخام الذي تم الحصول عليه من جزيئات الإكسوسوم إلى الغرفة العلوية لمرشح تنقية الإكسوسوم (عمود EPF) وأجهزة الطرد المركزي عند 4 درجات مئوية عند 5600 دورة في الدقيقة لمدة 20 دقيقة. بعد الطرد المركزي، جمع السائل في الجزء السفلي من العمود EPF. هذا السائل هو جزيئات exosomal المنقى. (ملاحظة: أعمدة EPF غير قابلة لإعادة الاستخدام)

2. تخزين الإكسوسوم: يجب تعبئة الإكسوسومات المنقاة في 50-100 ميكرولتر وتخزينها في ثلاجة ذات درجة حرارة منخفضة عند 80 درجة مئوية للاستخدام التجريبي اللاحق.

شروط التخزين الخامس

بعد استلام المنتج، قم بتخزين الكواشف بشكل منفصل. يرجى مزجها جيدا قبل الاستخدام.

الحل أ: النقل في درجة حرارة الغرفة وتخزينه في درجة حرارة - 18 درجة مئوية بعد فتح المجموعة (طبقة التجميد في الثلاجة التقليدية)؛

الحل ب: يخزن في درجة حرارة الغرفة؛

عمود EPF: يخزن في درجة حرارة الغرفة؛

الاحتياطات V

هذا المنتج مخصص لأبحاث علوم الحياة فقط!

السادس عناصر أخرى

لمزيد من الأسئلة الفنية، يرجى الاتصال بـ Umibio للحصول على مزيد من الإجابات.